실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Extraction/Isolation
bacterial cell total protein extraction 질문입니다.
레벨2 kodo2001 (과기인)
안녕하세요.
protein purification을 하기 전, bacteria cell pellet 획득 후, cell pellet을 깨고 total protein에 대한 정량을 BCA assay를 통해 진행하고자 합니다.
그런데 기존에 쓰던 RIPA buffer (cat # R4100-010, genDEPOT)을 넣고, mamalian protein extraction을 하던 방식처럼 하더니 단백질이 분리되지 않고, pellet이 그대로 가라앉는 것을 확인하였습니다.
그래서 bacterial cell pellet lysis buffer로 검색되는 RIPA buffer (cat # WSE-7423, atto)를 발견했는데....RIPA buffer 자체는 큰 차이가 없다라고 알고 있던 저는 DNase I과 protease inhibitor 외에는 차이를 발견하지 못했습니다.
단백질의 발현 여부 확인을 위해 정량 후 양을 늘려가며, 목적 단백질 확인을 하는 것이 목표이기 때문에 저는
1) 제가 알고 있는 부분에 있어 틀린부분이 있는지
2) 없다면 저 2가지만 더 기존에 RIPA buffer에 추가 하면 되는 것인지 추가를 하게 되면, 권장 농도까지 알고 싶습니다.
조직 실험한 하다가 갑자기 박테리아 관련 실험을 하려니 모르는 것이 많습니다. 많은 선배님들의 이해와 따뜻한 답변 부탁드립니다.
읽어주셔서 감사합니다.
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