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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 transfer후 폰슈 묻혔을 때 일정하게 나있는구멍
올챙이딸판바(대학생)  | 02.07 16:15
제목 그대로 transfer후 폰슈를 묻혀 젤에서 잘 넘어왔는지 확인하는데요..

멤브레인에 일정하게 동그랗게 구멍이 난 것 처럼 폰슈가 안묻힌 상태로 육안으로 확인이 됩니다.

무슨 구멍인지 대조해보았는데, 멤브레인과 젤 그리고 3m paper을 잡아주는 카세트의 구멍과 일치하는 간격과 크기였습니다.

카세트 구멍대로 폰슈가 안묻혀지며, detection과정에서 구멍이 나있던 부분의 밴드가 매우 희미하게 detection됩니다..

신생연구실도 아니고, Western blot anlaysis가 메인인 연구실이라, Western Blot analysis과정 조건의 문제는 아니라고 확신할 수 있습니다..

해당 증상을 겪으셨던 분들이나, 고견이 있으시면 공유부탁드립니다. 감사합니다.
#Western Blot analysis
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리Eigen  |  02.07 16:43  
올챙이m눈나  |  02.07 17:26  

같이 결합했습니다..

카세트 스펀지(저희 연구실에선 스펀지로 부르는데 말씀하신 물품이 맞습니다..) 3m 멤브레인 젤 3m 스펀지 카세트 이렇게 구성되어있습니다. 트랜스퍼시에.. 

개구리Eigen  |  02.07 17:41  

혹시 pad 한 쪽만 꽂으신거 아닌가요?

https://www.antibody-creativebiolabs.com/protein-transfer-from-gel-to-membrane-in-western-blot-assay.htm

위 링크에 있는 그림처럼 

양쪽 다 꽂으셨나요?

Cassette / Pad / Paper / Memrane / SDS-Gel / Paper / Pad / Cassette 

올챙이m눈나  |  02.07 17:52  

네.. 

말씀해주신 것 처럼

Cassette / Pad / 3m Paper 3장 / Membrane / SDS-Gel / 3m Paper 3장 / Pad / Cassette 로 구성하여 transfer진행하고 있습니다..

일단 버퍼 문제일까 싶어 버퍼를 다 버리고 다시 만들 예정이긴합니다..

처음 겪고 보는 문제라 당황스럽네요 ㅎㅎ.

개구리Eigen  |  02.07 18:20  

아무래도 압력이 고르게 안걸리는 거 같은데
평소에 같은 protocol로 잘 되시다가 갑자기 이번에만 그러신 건 가요?

그리고 참고로 해당 제품은 foam pad(스폰지)가 있어서
paper를 3장이나 쓸 필요는 없습니다.
아래 위로 1장만 해도 충분합니다.
3장씩이나 하면 너무 두꺼워져서 electrode에 잘 안들어갈텐데요?

올챙이m눈나  |  02.07 18:57  

네 실험실원이 2~3주 전부터 이런 증상이 보였다고 하네요.

평소에 같은 protocol로 진행하였고

연구실 신설이후 10년? 가까이 이 protocol로 진행하였어서, 

3장 paper로 계속 진행해왔습니다.. 

압력이 고르게 걸리지 않는 것 같다는 의견 감사합니다. 

원인을 찾아보도록하겠습니다. 감사합니다. 

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