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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 western blot 시 중단할 수 있는 단계는??
올챙이민드(과기인)  | 02.03 10:37

안녕하세요.

저희 랩이 조마간 이사를 가게되면서 실험 장비들을 새로 셋팅을 하게 됐는데요.

chemi doc이 너무 고가라 여건이 안되서 이사 전 입주해있던 곳의 장비를 사용해야 될 것 같습니다.

그런데 거리가 1시간 거리이기도 하고 거기에 연구공간도 없고 보관 장소도 없으니 필요한 물품은 직접 들고가서 장비만 후딱 쓰고 다시 복귀해야될 것 같은데, 

 

1. blocking 단계에서 shaking 후 blocking buffer에 담가놓고 1차 항체 들고 1시간 이동. 냉장 창고에서 o/n 진행시키고 다음 날 2차 항체 들고 다시 현장으로 이동. 2차 반응/세척 후 ECL 반응시켜 chemi doc 과정 진행. (이동 중 항체에 문제가 생기지 않을지 걱정...)

2. 2차 항체 붙이고 반응 완료후 TBST에 담가놓고 이동. 현장에서 washing 마무리 하고 ECL 처리해서 chemi doc 진행 (1시간 이동하는 과정 중에 2차 항체가 씻겨나진 않을까 걱정...) 

 

중에 어떤 방법이 더 좋을 지 알 수가 없어서 물어봅니다.

이 외에 더 좋은 방법이 있을까요??

#western blot
 
#chemi doc
 
#중단
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
뒷다리에효효  |  02.03 11:23  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

1. blocking 단계에서 shaking 후 blocking buffer에 담가놓고 1차 항체 들고 1시간 이동. 냉장 창고에서 o/n 진행시키고 다음 날 2차 항체 들고 다시 현장으로 이동. 2차 반응/세척 후 ECL 반응시켜 chemi doc 과정 진행. (이동 중 항체에 문제가 생기지 않을지 걱정...)

-> 냉장 창고에 2차 항체를 두고 다음날 가서 하면 되지 않나요?? 2차를 미리 만들어 놓지 못하는 이유가 있을까요? 1시간 이동하는 거리에 1차 항체는 아이스 보관하시면 괜찮습니다. 

2. 2차 항체 붙이고 반응 완료후 TBST에 담가놓고 이동. 현장에서 washing 마무리 하고 ECL 처리해서 chemi doc 진행 (1시간 이동하는 과정 중에 2차 항체가 씻겨나진 않을까 걱정...) 

-> 그리 쉽게 안떨어집니다. washing buffer에 담궈놓은 상태로 이동해도 항체 잘 나옵니다.

올챙이민드  |  02.03 11:27  

 

일단 2차 항체도 들고 움직이려던 이유는 냉장 창고에 보관함이 지정되어 있어서 입주업체가 아니면 사용할 수 없더라고요. 그래서 그 가능성은 배제하고 생각했습니다.

그리고 2차 항체를 붙이고 이동 시 쉽게 안떨어진다고 하니 이 방법이 제일 가능성이 높겠네요.

답변 감사합니다. 

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