이번 방학에 연구실에서 western blotting 하고 있는 학부생입니다.
transfection된 cell에서 protein을 추출한 뒤 WB할 때 타겟Ab말고 beta actin을 같이 하는 것은 이유가 무엇인가요?
그냥 actin이 가장 진하게 나와서 잘 됐는지 확인하는 용도인가요?
수준 낮은 질문 답해주셔서 감사합니다.
B-actin 및 GAPDH 은 house keeping gene으로
어떠한 조건에 관계없이 항상 모든 조직에서 일정하게 발현되는 gene으로 control로 주로 사용하기에 실험군과 비교할때 주로 사용합니다.
분석을 진행한 샘플간의 발현양 차이를 분석을 해야하는데, 그 기준이 되는 단백질의 양이 똑같은 양이 로딩 되었는지를 파악 하기 위해 모든 세포에서 잘 발현 한다고 알려진 단백질들을 함께 분석 하는것입니다~
1번샘플은 5만큼의 단백질을 넣고, 2번샘플은 10만큼의 단백질을 넣었는데
둘다 타겟 단백질을 2만큼 발현 했다면, 1번과 2번은 발현양/단백질양 이 2배가 차이나게 되는거니까요.
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