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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 WB(Western Blot) 시 a-tubulin이 일정하지 않게 나오고 피펫팅에 관한 질문
알Lanna(대학생)  | 01.25 16:53

안녕하세요. 실험실 초보 석사 1학기 대학원생입니다. 

현재 실험실에서 western blot실험을 할 때 a-tubulin을 housekeeping으로 사용하고 있는데 일정하게 나오지 않고 있습니다. 

모든 protocol을 익숙히 하고 실험을 진행하고 있는데도 불과하고 일정하게 나오지 않는데 아무래도 피펫팅이 큰 문제로 되고 있는것 같습니다. 일정하게 나오지 않게 되는 문제초래점 몇가지 제시해 주시길 바랍니다. 

 Ps. BCA assay로 protein정량을 진행하고 있는데 R^2=0.98~0.99로 나오고 있습니다.

실험을 오래 해오신 선배님들의 조언을 바랍니다~~^^

#WB
 
#웨스턴
 
#피펫팅
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
good luck  |  01.25 17:01   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

파이펫이 문제라고 생각된다면

보정을 먼저 고려해봐야 할 것 같습니다만

생각보다 파이펫 이슈는 크리티컬하지 않습니다.

housekeeping gene을 western 하는거라면

cell lysate를 다룰 것이고

harvest된 cell number의 차이

혹은 cell lysis 정도의 차이가 main issue가 아닐지...

알이뮨프로페셔널  |  01.26 15:37  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

house keeping gene을 바꿔 보는 것은 어떠신지요 beta-actin이나 GAPDH를 대부분 사용하지 않나요?

알Lanna  |  01.27 15:56  

두분 답변 감사합니다. ^^

저희 실험실에서는 a-tubulin과 GAPDH를 위주로 사용하더라구요. GAPDH로 한번 시도해 보겠습니다.

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