Protein size ladder는 안 넣으셨나요?
여튼
1. 적어주신 내용으론 서플라이의 전압을 고정으로 했는지 전류를 고정으로 했는지? 모르겠네요. Transfer 조건은 랩마다 고수하는 조건이 꽤 다르긴 합니다만 어느 정도 허용범위는 있습니다

2. 전류방향과 gel - membrane 방향을 반대로 했을 가능성도 있습니다

3. Pvdf membrane이시라면 메탄올에 담궈두는 과정을 빼먹으신 건 아니신지

- Protein size ladder는 안 넣습니다 . 비싸기 때문에 선생님이 넣지 않으다고 말씀했습니다. 

- membrane 메탄올에 담궈두는 2 분 과정을 했습니다

transfer가 안 되는 이유는 한두 가지가 아닙니다.

따라서 실험 내용을 가지고 하나하나 살펴보며 원인을 찾아가야 합니다.

antibody 쓰기 때문에 marker를 안 쓰는 것으로 이해가 되는데

antibody를 사용한다고 하더라도 target 외에 다른 단백질이 나올 가능성이 제로인 것은 아닙니다.

또한 western blot에서 marker는 control의 기능도 합니다.

control이 없는 실험이 왜 안 되었는지는 확인할 기준이 없기 때문에 트러블슈팅을 하기가 어렵습니다.

본인의 실험이 단백질이 없는 것인지 antibody capture가 안 된 것인지 transfer가 안 된 것인지 무엇으로 증명하시겠습니까?

SDS-PAGE가 제대로 되었는지,

Transfer는 제대로 되는지

하나하나 확인하면서 step by step 넘어가야 어느 step에서 잘못되었는지 확인할 수 있습니다.

랩에 재료비가 부족해서 비용을 아끼려고 하시는 것 같은데

차라리 안티바디 양을 줄이시고 marker는 매 실험 사용하시길 권해드립니다.

알겠습니다 , 너무 감사합니다 

실험 다시 해보겠습니다