안녕하세요.
Binary vector 의 일종인 pBI121 의 vector map 을 보시면:
https://www.snapgene.com/resources/plasmid-files/?set=plant_vectors&plasmid=pBI121
LB 와 RB 사이에는 CaMV 35S promoter ( Cauliflower Mosaic Virus 35S RNA promoter) 와 NOS promoter ( NOpalin Synthase promoter) 가 있는데, 이들은 바이러스나 박테리아에서 유래하긴 했지만 식물에서 잘 발현하는 것으로 알려진 프로모터들입니다.
이 프로모터들은 아마도 바이러스나 박테리아 (Agrabaterium) 가 식물을 감염시킨 다음 자기들의 증식에 유리한 RNA 또는 대사 산물들을 식물 전사 인자들을 빌려서 강하게 발현시키도록 진화한 결과라고 생각합니다.
논문을 찾아보니 식물 유래 ASF-1, ASF-2 와 같은 전사 인자 (아마도 bZIP transcription factor 등을 포함한 여러 전사 인자들의 complex?) 들이 이 서열들에 binding 하는 것으로 나오는데, 아주 자세한 인자들은 의외로 규명이 잘 안 되었는지 쉽게 찾아지지가 않네요.
박테리아/바이러스 유래 프로모터가 식물 내로 전달되는 것이, 어쩌면 GOI 가 잘 발현하기 위한 필요 조건이라고 할 수 있겠습니다.
물론 이 프로모터들이 모든 식물, 모든 조직에서 다 잘 발현되는 것은 아니고, ubiquitin 프로모터 등, 필요에 따라 여러 종류의 프로모터를 쓰는 것으로 알고 있습니다.
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레벨5
pasg1345
(과기인)
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23.01.08 19:58
크옷님 친절한 설명 감사합니다.
그런데 제가 사용하는 vector는 GOI 앞에 lac promoter가 달려있는데
그렇다면 해당 vector를 사용할 경우 plant cell에서 IPTG induction과 같은 과정을 진행해야 하는걸까요?
아니면 말씀하신 대로 식물 세포 내에 해당 전사인자가 있어서 자연스럽게 발현이 되는 것일까요?ㅠㅠ
감사합니다.
> 그런데 제가 사용하는 vector는 GOI 앞에 lac promoter가 달려있는데 그렇다면 해당 vector를 사용할 경우 plant cell에서 IPTG induction과 같은 과정을 진행해야 하는걸까요? 아니면 말씀하신 대로 식물 세포 내에 해당 전사인자가 있어서 자연스럽게 발현이 되는 것일까요?ㅠㅠ
말씀하신 vector 에서 lac promoter 가 GOI 앞에 있는 유일한 프로모터인가요?
식물에서 dexamethasone, ethanol, heat 등으로 transgene 발현을 유도하는 시스템은 봤지만 IPTG 로 직접 유도하는 경우는 본 적이 없고, IPTG 는 lactose 대사 물질을 흉내내어서 repressor 를 제거하는 방식이라 식물 세포에서 작동할런지도 모르겠습니다.
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혹시 같은 vector 의 LB - RB 내부에 lac promoter (operator) 에 결합하는 인자를 발현하는 cassette 가 더 있거나, 혹은 그러한 cassette 를 이미 포함한 형질 전환 식물과 향후 교배를 하는 "transactivation" 기법에 쓰이는 vector 는 아닌지요?
예를 들어 다음 논문의 Fig 1. 처럼, lac operator 에 결합하는 인자를 발현시키는 construct 를 형질 전환시킨 report 식물과 교배하는 방식입니다:
https://www.pnas.org/doi/10.1073/pnas.95.1.376#abstract
이 논문의 Fig. 3 에도 예가 좀 더 나와 있습니다:
https://www.pnas.org/doi/10.1073/pnas.95.1.376#abstract
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Vector 이름과 map 등을 볼 수 있으면 좋겠네요. 그리고 해당 vector 가 유래한 연구 등을 찾아보시면 왜 lac promoter (operator) 가 그 자리에 있는 지 알 수 있으리라 생각합니다. .