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본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
- 자르는 DNA가 어떤 DNA인가요?
- 어떤 제한효소로 잘랐나요?
uncut DNA 를 젤에서 봐서 확인된 양만큼 제한효소로 잘라서 그걸 다 젤에 걸어도 안보인다면 아마도 exonuclease 오염으로 DNA가 다 분해된 경우도 있습니다.
tip과 tube를 새로 멸균한 것 사용, DW를 다시 멸균항 것 사용, buffer는 새것을 사용하면 해결이 됩니다.
어떤 DNA를 어느정도 양에 제한효소 어떤걸 얼마나 넣고 얼마동안 어떤 조건에서 처리했는지 등이 전혀 안적혀 있어서 답변이 어렵습니다.
자세한 실험 조건을 말씀해주셔야 어디서 잘못된 것인지 판단할 수 있겠죠?
1. 제 차가 안움직여요. 왜 그런지 이유를 아시나요?
2. 차가 움직이게 하려면 어떻게 해야 하나요?
이런식으로 질문하면 자동차 명장이 와도 해결 못해줘요.
차가 몇년 된거고, 시동은 걸리는데 뭐가 불이 안들어오고 연료는 꽉 차 있고 어쩌구 저쩌구 세부적인 설명을 기본적으로 해줘야 어느 부분을 체크해보라는 말이라도 해주죠.
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레벨2
bio1296
(대학원생)
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23.01.04 12:07
자세한 사항들을 적어놓지 않아서 죄송합니다
저는 바이오니아에서 gene synthesis 를 요청해 p-BHA vector안에 HIV-1, HIV-2가 있는 채로 잘 전달 받았습니다.
그리고 이것을 자를 수 있는 방법이 EcoR1이라는 단일 제한효소로 자르는 수 밖에 없어서 이걸로 잘랐으며 제한효소는 엔지노믹스 것을 사용했고 진행했던 프로토콜은 아래와 같습니다!
DNA 농도 : 201ng/ul
- Normal protocol
- Substrate DNA --> 1 μg 4 μl
- 10X EzBuffer EcoRI 1X --> 5 μl
- EcoRI --> 1ul
- Sterile water up to 50 μl
Incubate at 37℃ for 1 hr
Thermal inactivation --> Heating at 65℃ for 20 min inactivates EcoRI.
- 우선 받은 DNA는 반드시 E.coli에 TF해서 보존을 하세요.
- 계속 자르지 말고 E.coli에서 분리한 후 업체에서 받은 plasmid와 분리한 plasmid를 잘라보세요.
- 업체에서 받은 DNA양이 얼마인지 모르겠지만 정제를 해서 잘라보는 것도 좋을 듯 합니다.
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레벨2
bio1296
(대학원생)
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23.01.06 16:50
네 정말 감사합니다!
꼭 그렇게 진행해보도록 하겠습니다~!
답변 감사드립니다.