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질문 제한효소 및 전기영동 실험
알Yul(일반인)  | 2022.12.11 13:51

안녕하세요, 전기영동 실험을 처음 해보는 대학생 입니다.
플라스미드 추출 후 제한효소를 이용하여 DNA 절단을 하였는데
대조군으로 사용한 
pQE60-GBP plasmidEcoR1으로 one cut을 하였는데 2개의 band가 보입니다... 왜 이런 것인가요...??

또한 여기엔 제한효소로 EcoR1을 사용하였는데 이것 말고도 EcoR5와 같은 다른 제한효소도 있다고 하더라구요. 혹시 EcoR1말고 다른 제한효소를 사용하여 확인하는 방법도 어떤 것이 있나요??

#전기영동
 
#제한효소
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리강시  |  2022.12.12   

플라스미드르르 제한효소로 절단해서 agarose gel에서 확인하는 실험은 절단된 플라스미드 밴드의 크기를 보아 맞는 플라스미드인지 확인하는 실험이겠네요.

플라스미드에 여러 종류의 제한효소 자리가 있을겁니다. EcoRI이 아니더라도 다른 제한효소로 잘라서 확인 가능하면 사용하면 되지요. 단, 절단된 제한효소 절편이 잘 분리되고 size marker와 비교해서 각 절편의 크기를 확인할 수 있으면 좋지요.

플라스미드를 one cut했는데, 그 one cut이 plasmid에 EcoRI site가 딱 하나 있다는 말이라면, single band가 나와야 정상입니다.

자른 plasmid와 안자른 plasmid를 옆에 걸어서 비교해 보세요. 그러면 그 두 bands가 안잘린 밴드인지, 일부만 잘려서 잘린 밴드와 안잘린 밴드가 함께 있는 것인지 확인이 됩니다.

그래서 보통 이런 종류의 질문에는 gel 사진을 함께 제시하지요.

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