실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Transformation
Transformation가 잘 안 돼요ㅜㅜㅜㅜ
레벨2 ggy (대학원생)
안녕하세요. 실험을 시작한 지 얼마 되지 않은 새내기입니다. Addgene에서 pJBEI-6410이라는 벡터를 구매했습니다. 벡터를 저장하기 위해 E. coli XL1-blue, DH5a에 transformation을 시도했는데 colony가 나오지 않았습니다..... Addgene에서 권장하는 DH10B를 사용하지 않아서 그런걸까요? 아니면 방법이 잘못된 것일까요? T.F 방법은 아래와 같습니다. 1.배양한 cell을 원심분리 후 상층액 제거, 0.1M CaCl2 1ml넣고 파이펫팅으로 살살 풀어주고 튜브의 7ml 선까지 0.1M CaCl2 넣은 후 얼음 속에 40분간 방치 2. 원심분리 후 상층액 제거 후 약간의 0.1M CaCl2넣고 살살 풀어준 후 2ul 플라스미드가 담긴 튜브에 100ul 넣은 후 15분 방치 3. 42도에서 48초 heat shock 후 바로 얼음에 10분 보관 4. LB 배지 100ul 넣고 37도 스탠딩 인큐베이터에서 배양 5. 플레이트에 도말
Bio마켓 프리미엄