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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 웨스턴 밴드 사이에 세로선 질문입니다 ㅠㅠ
올챙이mingudam(대학생)  | 2022.12.08 13:24
첨부파일 파일첨부: KakaoTalk_20221208_131522956.jpg (656 KB)
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안녕하세요..!

caco2 cell로 웨스턴 분석 후 밴드 사이에 저렇게 칸막이 처럼 세로선이 생겨

내려오는데 따로 이유가 있을까요? 

같은 조건의 다른 샘플도 p-stat6 분석 결과가 저렇게 칸막이쳐서 나오네요.. 

p-stat6 분석한 결과이고, Tris-glycine 10% 젤을 사용했고, 

2x SDS sample buffer 사용하여 protein 얻은 후 

소니케이터 -> 98도에 끓여 보관된 샘플을 20ul 로딩했습니다 ㅠㅠ ...

transfer 후 blocking 은 2시간 상온 -> 1차 ab overnight 4도씨에 진행하였고 이후 wash 는 5분씩 3번 했습니다..ㅠㅠ 원인이 무엇일까요?...

#stat6
 
#westernblot
 
#band
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리CBD 김선우  |  2022.12.08   

1차 항체 dilution이 어떻게 되나요?

올챙이mingudam  |  2022.12.08   

1:1000 으로 희석했습니다.. 

1:1000 과 1:1500으로 TEST 해봤을 때 저런 현상이 일어나지 않았어서

ab 회사에서 추천하는 1:1000으로 진행했습니다 ㅠ_ㅠ

개구리CBD 김선우  |  2022.12.08   

ab test했을 때 이상이 없다는 샘플과 저 샘플은 어떻게 다른가요?

올챙이mingudam  |  2022.12.08   

특별히 달라진 건 없습니다.. 

TEST 할 때 cell 감작 물질의 농도와 시간만 조절했었어서..

같은 조건이라고 봐도 될 것 같습니다 ㅠㅠ  

올챙이진vv  |  2022.12.08   
디텍할때 ecl이 너무 쎄거나 2차가 너무 쎘거나 워시가 덜 됐을 수 있어요. 희석을 추천드려요.
올챙이진vv  |  2022.12.08   
디텍할때 ecl이 너무 쎄거나 2차가 너무 쎘거나 워시가 덜 됐을 수 있어요. 희석을 추천드려요.
대왕개구리SPEED  |  2022.12.08   
세로선은 아무것도 없는 부분인데 사진처럼 나오면 sample loading 문제이기 때문에 loading 할때 좀더 주의해서 해보세요.
개구리CBD 김선우  |  2022.12.09   

단백질이든 항체든 뭔가 농도가 지나치게 높을 때 저랬는데 1차 항체는 아닌 것 같네요. 단백질 loading 양을 좀 줄여보실래요?

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