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 전체 > Cell Biology > Cell Culture
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질문 잘 뭉치는 cell culture 법
올챙이쥐팤(대학원생)  | 2022.12.06 15:46

안녕하세요

이번에 새로 HepG2 cell line을 키우게 되었는데 얘가 잘 뭉쳐서 자라는 성격 때문인지 트립신을 아무리 쳐도 안 떨어지는 세포들이 많습니다..

cell 이 자라는 속도는 느려서 일주일에 한 번 subculture 해줘도 무방할 정도인데 너무 뭉쳐서 자라서 트립신을 쳐도 정말 잘 안떨어져서 거의 50%만 떨어지고 50% 은 버리고 있습니다..

중간 중간에 떼서 풀어주고 다시 분주를 해줄까 생각도 했는데 괜히 loss 만 생기는 건 아닐지 생각도 들고..

잘 뭉치는 성격을 가진 cell culture 에 대한 팁이 있다면 부탁드립니당.

감사합니다.

#HepG2
 
#cell
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
()  |  2022.12.06    

fresh한 trypsin 처리하시고

37도 인큐베이터에 보통 1-2분 두지만

cell이 잘 안 떨어지면 좀 길게 둬보세요

잔여 미디어때문에 trypsin이 neutralization될 수 있으니

PBS로 wash한 후에 trypsin 처리하시구요

개구리CBD 김선우  |  2022.12.06   

다른 cell 뗄 떼는 문제가 없나요? trypsin activity를 확인해 볼 필요는 있을 것 같네요. trypsin 오래치면 오히려 cell들이 더 뭉칩니다. 죽은 세포에서 DNA가 흘러나와 뭉치게 되는 원인이 된다고 하네요. 원래 Hepg2가 떡져서 자라는 양상이긴 합니다만 trypsin inactivation 시키고 spindown 및 suction 후 1ml pipet으로 풀어주면 seeding할 때 single cell들로 잘 풀어졌습니다.  

개구리오이가싫어  |  2022.12.06   

저도 HepG2 culture 중인데 37도 인큐베이터에 2분 정도 놔둡니다 

올챙이쥐팤  |  2022.12.06   

HepG2 cell culture 어떻게 하시나요? 뭉쳐서 자라거나 그래서 잘 안떨어지거나 하지는 않으신가요??  자라는 속도는 어떠신지.. ㅜ 어느 크기 dish 에 키우세요??

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