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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
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질문 FAM probe 형광 발현 문제,,,,
알할까말까해(대학생)  | 2022.12.05 20:57

안녕하세요, 제가 하다하다 안돼서 이곳에 글을 남깁니다.

제가 얼마전부터 NTC 샘플에서 계속 형광이 증가가 되는 문제가 발생하고 있는데요, 처음에는 오염인줄 알고 시약도 다 새로 주문을 해서 실험을 계속 하고 있는데 여전히!!! NTC 샘플에서 형광이 선형적 증가을 하고 있습니다.

혹시나 해서 gel도 내려봤는데 당연히!!!! amplicon은 보이지 않고요,,,,

Probe에 손상이 갔나해서 새로 주문을 하고 별짓을 다해도 계속 이런 문제가 발생하네요,,,,

사용하고 있는 Probe는 FAM-TAMRA 입니다,,,,

upload_image

도대체 왜 그런지 작은 힌트라도 좋으니,,,PCR 고수님들 tip좀 주세요~~~~

 

#qPCR
 
#FAM
 
#False
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리AstV  |  2022.12.06   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
제 생각엔 NTC 샘플이 오염된 것 같습니다

시약도 다 바꿔봤고, 원래 증폭이 안되던 NTC에서 어느 날부터 증폭이 된다면.. NTC샘플 오염된 것 같네요

그리고 taqman probe 사용할땐 amplicon size가 100bp 이내로 짧게 프라이머 프로브 디자인을 하는데..., 젤 사진 아래쪽에 뭔가 밴드같은게 있어 보이는데 NTC샘플 대신해서 순수한 DW로 PCR한 결과도 비교해보시면 좋을 것 같습니다.
(래더 크기 정보가 사진에 없고..젤이 울어서 확인이 어렵네요)

예전에 저는 중요한 실험 할때 positive, NTC샘플, 그리고 그냥 DW도 PCR 걸어서, 같이 확인했습니다.
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