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질문 stable cell line 만들때
알avocaddo(대학생)  | 2022.12.05 14:20

u87 세포를 가지고 stable cell line을 만들려고 합니다.

polyclonal을 만들고 limiting dilution을 통해 monoclonal population을 만들려고 하는데 polyclonal population까지 만들고 이것을 cell stock을 하여 나중에 (대략 3달 뒤) limiting dilution을 하려고 하는데 문제 없겠죠? (개인사정으로 바로 limiting dilution을 하지 못하게 됬어요..ㅠㅠ). 그리고 cell stock을 할때 보관을 -80도 deep freezer에 보관을 하나요 아니면 질소탱크에다가 보관을 하나요?

Transduction을 진행 후 antibiotic selection을 진행을 하는데 protocol을 찾아보니깐 control 군 (lentivirus가 없는 곳)에 있는 세포들이 다 죽을 때 까지 incubator에 보관을 하고 2-3일 마다 media change를 해주라고 나와있는데 죽은세포와 살아있는 세포는 현미경으로 어떻게 관찰을 하나요? 모습에 차이점이 있나요? 그리고 media change는 antibiotic이 들어간 media를 가지고 진행을 해주면 되나요?

 

아직 실험 초보여서...ㅠㅠ 답변 부탁드리겠습니다! 

 

 

#stable cell line
 
#limiting dilution
 
#transduction
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
앞다리실험은안될때가더많아  |  2022.12.05   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

 1. stock을 하여 나중에 (대략 3달 뒤) limiting dilution을 하려고 하는데 문제 없겠죠?

stock 과정에 문제가 없었다면 상관없습니다.

2. cell stock을 할때 보관을 -80도 deep freezer에 보관을 하나요 아니면 질소탱크에다가 보관을 하나요?

2주 이상 보관하려하면 질소탱크에 보관을 해야 합니다.

3. antibiotic selection 관련

동일한 density로 깔은 control군과 transduction된 세포군에 같은 농도의 antibiotics를 처리한뒤 control군에서 세포가 다 죽은 시점부터는 일반 media를 사용해도 됩니다. 현미경을 통한 죽은 세포 확인은 U87경우 adherent culture 세포이므로 바닥에 부착된 세포가 죽어가면서 쪼그라들어 동그랗게 변하고 곧 떨어집니다.

알avocaddo  |  2022.12.07   

답글 감사합니다!!

antibiotic 처리한 뒤 일반 media를 사용하면 basal media + 10% FBS + 1% P/S로 된 media로 사용하면 되나요? 

앞다리실험은안될때가더많아  |  2022.12.07   

넵. 어떤 media를 쓰셨는지 모르지만 답변하신 것이 평소 culture media인 것 같네요

culture시 사용하시는 조성으로 쓰시면 됩니다. (Transduction 전의 media)

 

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