안녕하세요.
cell에서 mtDNA를 추출해 qPCR을 하려고 합니다.
사용 kit 는 DNeasy blood & tissue (qiagen)
사용 예정입니다.
제가 궁금한 것은 미토콘드리아 DNA 추출 키트를 사용하지 않더라도 추출이 가능할지가 궁금합니다.
혹시 사용해보신분들 계신지 여쭤보고 싶습니다.
말씀하신 키트를 포함한 일반적인 gDNA 추출 방법을 사용하시면 세포내의 모든 DNA가 추출 되므로 (nuclear DNA + mt DNA), 미토콘드리아 DNA 도 당연히 얻으실 수 있습니다.
다만 미토콘드리아 DNA '만' 필요하신거라면 Mitochondria isolation kit 을 사용하시거나 differential centrifugation 등의 실험을 통해 미토콘드리아만 따로 얻어낸 다음 DNA를 추출 하셔야 합니다.
우선 답변 감사드립니다.
제가 궁금했던 점은 gDNA kit 만으로도 mtDNA를 추출하는데 무리 없이 정확히 가능할지 궁금하였습니다.
gDNA 용 추출 kit는 있기 때문에, 미토콘드리아 추출 키트를 또 사기엔 무리가 있어 궁금하였습니다.
그래서 gDNA 추출 KIT 만으로 mtDNA를 추출해보셨는지 궁금합니다
네, qiagen 키트로 mtDNA도 추출 하실 수 있습니다.
미토콘드리아 DNA '만' 추출 하고자 하시는거라면 이 키트로 gDNA 추출에 앞서서 세포 내에서 미토콘드리아만 골라낼 수있는 실험 과정을 추가해주기만 하면 됩니다.
그리고 이 경우에는 마지막에 elution buffer volume 만 20-50 ul 정도로 적게 해 주시면 됩니다.
아래 논문 참고하시길.. (실제 예시 논문입니다.) https://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0139253