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 전체 > Cell Biology > Transfection
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질문 ES cell line lentiviral transduction 후 delay된 cell death
알BioMate(과기인)  | 2022.12.01 00:22

최근 embryonic stem cell 라인에 lentivirus를 이용하여 transduction을 시켜주는 실험을 하고 있습니다. 

Infection으로부터 24시간 후 selection을 시작해주었고 세포는 몇 일 동안 잘 자라서 passaging도 한번 해주었습니다. 한 5-6일 정도는 selection drug이 포함된 미디엄에서 아무 문제 없이 잘 자란 것 같습니다. 그런데 갑작스럽게 massive한 cell death가 발생하기 시작했습니다. 세포가 자라기는 하는 것 같은데 그 속도와 비슷하게 (아니면 조금 더 빠르게?) 사멸하여 육안으로도 둥둥 떠있는 세포가 보일 정도입니다. 현미경 상으로 관찰하였을 때 컨탬처럼 보이는 부분은 없고, 죽은 셀만 제거해주면 바닥도 깔끔해보입니다 (mycoplasma 컨탬 검사는 안 해봤습니다).

이렇게 보면 바이러스의 문제인가 싶기도 하지만, 동일한 바이러스로 infection된 embryonic stem cell 다른 셀라인은 이상 없이 아주 잘 자라고 있어서 도대체 뭔가 싶습니다...

같은 embryonic stem cell이라도 셀라인마다 efficiency가 다를 수가 있나요?

efficiency 문제라면 왜 cell death가 delay되서 나타나는지도 잘 모르겠습니다 (transduction 없이는 보통 selection 3일차에 90% 이상 사멸합니다). 

작은 힌트라도 소중한 답변 주시면 정말 도움이 많이 될 것 같습니다...감사합니다!

#transduction
 
#selection
 
#hESC
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
앞다리실험은안될때가더많아  |  2022.12.01   
혹시 lenti의 promoter가 어떻게 될까요?
CMV promoter라면 개인적인 경험으로도 그렇고 문헌상으로도 hPSC에서 빠르게 transgene 발현이 떨어집니다. https://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0012413
Line별로도 lenti의 promoter를 꽤 타더라구요
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