[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
커스텀텍
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
BioLab 장재봉 교수
전체보기 안전점검 LABox
 전체 > Molecular Biology-DNA > Transformation
조회 1383  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 Transformation 효율이 너무 안좋습니다.. 저와 비슷한 경험 하신분 있으신가요??ㅠㅠ
알또찌까까(대학원생)  | 2022.11.29 10:00

안녕하세요 현재 대학원 석사 1년차입니다.

원래 게속해서 진행해온 cloning과 transformation이 8월달 부터 인가 뭔가 점점 이상해졌습니다. 저희가 기존에 만든 C-cell을 이용해서 계속해서 transformation을 진행했는데요, 8월달 부터 transformation을 한 이후에 mini-prep을 진행해온 결과 원래는 300-400ng으로 잘 나왔었는데 어느순간 갑자기 50ng으로 확 효율이 떨어졌습니다.(mini prep kit 사용했습니다.) 너무 이상해서 여러번 transformation도 해보고 배지도 다 바꾸고 새로 다 만들어서 했는데도 이상해서 C-cell이 문제겠거니 해서 다른 랩에서 얻어온 C-cell을 이용해서 transformation을 해본 결과 비슷하게 나왔습니다.

그래서 C-cell을 사서 새로 transformation을 했는데 다행히 colony가 잘 떠서 liquid culture을 진행했는데요, 아니나 다를까 또 mini-prep을 진행한 결과 50ng밖에 안나왔습니다...ㅠ 심지어 안자란것도 있습니다..ㅜ

antibiotic marker는 ampicilin을 이용하였구요.. 새로 산 DNA가지고도 transformation을 했는데 하나도 자라질 않았네요.. 일단 저희 학교 내 실험실에서 해볼 수 있는 모든 경우의수를 다 해보았는데 도저히 돌파구가 보이지 않네요... 혹시 저와 같은 비슷한 경험을 해보신 분이나 problem solving하신 분들 있으신가요??ㅠㅠ 

#transformation
 
#mini prep
 
#competent cell
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2022.11.29   

- TF 효율 문제가아니라 prep.문제로 보입니다.

 

- CP cell 종류가 어떻게 되나요?

 

- empty vector를 추출해도 수율이 낮게 나오나요?

알또찌까까  |  2022.11.29   

CP cell 종류는 DH5알파 이용하였구요,

empty vector transformation 했었을때도 동일하게 나옵니다ㅠㅠ

miniprep kit 같은 경우에는 저희 실험실에서 예전부터 아무 문제없이 계속 사용했었던거라 아무 의심없이 사용했었습니다ㅠㅠ

저희 실험실에서 저만 이런게 아니라 다른 인원들도 동일하게 나와서 계속해서 뭔가 이상한게 느껴집니다ㅠㅠ

대왕개구리SPEED  |  2022.11.29   

- 다른 Lab의 prep. kit를 빌려서 한번 해보세요.

개구리아이이이잉  |  2022.11.29   
heatshock 온도도 다시 체크해보세요
지나가는 사람  |  2022.11.29    

날이 추워지면서 랩의 온도가 낮아지면 lysis 버퍼가 결정이 생기는데.. 그걸 그대로 사용한건 아닌지요...

프렙 하시기전에 솔루션들이 모두 잘 용해 되어 있는지 확인해 보시는걸 추천드려요.

답변하기
할인행사/신제품신기술 광고 검색광고
코람바이오텍 코람바이오텍
[Cell Signaling Technology] Primary Antibody 전제품 20% 할인 행사 (2.28까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
파격적인가격 Personal Western Blot Imager 장비 Azure chemiSOLO (12.31까지)
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN 한국공인대리점] TECAN Microplate reader/ IMPLEN Nanophotomet.. (4.11까지)
인성크로마텍 인성크로마텍
[Fluidic Analytics] Complex background 에서의 농도(conc.) 및 결합 친화..
바이오닉스 바이오닉스
[TECAN No.1 한국공식대리점] TECAN NGS 전처리 자동화 System MagicPrep™ 이벤트 (3.4까지)
모아바이오 모아바이오
[AFG Scientific] *새해맞이* 20% 특가 할인 프로모션! 2만가지이상의 모든 ELISA Kit.. (2.28까지)
최근등록   더보기 >
protein purification 중 binding 문제   02.04
관리된 소 조직 구할 수 있는 방법이 있을까요?   02.04
Immunoprecipitation 후 immunoblot 결과 해석   02.04
western blot band 개선 좀 부탁드립니다 ㅠㅠ   02.04
qPCT Tm값   02.04
Fixed 조직 갈아서 FACS 해보신 분 계신가요?   02.04
실험하다답이안나와요   02.03
푸른곰팡이 배양 및 streaking 질문입니다   02.03
전체(항생제 미사용을 말하는 겁니다) 미생물상 배양법?   02.03
cell doubling time 질문   02.03
최근답변자 우수답변자
대왕개구리SPEED

개구리토라

알롱암몽키

꽃개구리bio

올챙이해조칼슘풍덩

알란울

개구리무광

알karan

대왕개구리강시

꽃개구리Kozmoj

꽃개구리TX

개구리달려라~

개구리G.P.Ts

개구리냥냥아빠

대왕개구리SPEED

대왕개구리엘피스

실험관련연재
세오 연재중실전 실험 프로토콜 101
세오 (필명) (Cincinnati Children’s Hospital Medical Center)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
박은총 연재마감후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
Mr.S 연재마감의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재마감실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
이제욱 연재마감생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
필코리아테크놀로지 광고