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질문 피부주름 AP-1, MMP-1 관련 질문드리고 싶습니다
올챙이꿈많은청년(대학원생)  | 2022.11.25 16:59

안녕하세요 선생님들

HaCaT Cell에 UVB를 처리하여 피부주름 실험을 진행하는 꿈많은 대학원생입니다.

 

피부주름 실험을 하면서 

UVB를 처리한 세포에 제가 처리하는 추출물 A를 처리했을 때

Western 실험과 Luciferase실험을 통해 MMP-1 발현 및 MMP-1 transactivation Level 감소량을 확인했습니다

 

AP-1 관련 확인하기위해서 UVB를 처리한 세포에 제가 처리하는 추출물 A를 처리했을 때

AP-1 Transactivation(Luciferase)과 p-c-Fos, p-c-Jun Western Level에선 샘플 처리군에서 증가했습니다..

 

MMP-1관련 인자는 줄이는데, AP-1 관련인자를 증가시키는

데이터를 앞에두고 논문을 찾고 공부를 하고있지만 뾰족한 해결책이

보이지 않아, 브릭 선생님들의 지혜를 구하고자 글을 작성하게 되었습니다.

 

미리 감사드립니다. 꼭 지혜를 나눠주세요!!

#HaCaT
 
#AP-1
 
#MMP-1
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2022.11.25   

- sample을 먼저 처리하고 UVB를 처리 했나요?

올챙이꿈많은청년  |  2022.11.25   
네 선생님
샘플처리 후 한시간 뒤 UVB 조사하였습니다.
그 후 단백질 발현시간에 맞게 프랩하여 실험진행하였습니다!
대왕개구리SPEED  |  2022.11.25   

- 질문에는 "피부주름 실험을 하면서 UVB를 처리한 세포에 제가 처리하는 추출물 A를 처리했을 때"라고 나와있습니다만..

 

- 그리고 cell은 seed culture 후에 안정화 시간을 충분히 준후에 물질 처리를 했나요?

 

- sampling은 몇시간째 했나요?

올챙이꿈많은청년  |  2022.11.26   

- 질문에는 "피부주름 실험을 하면서 UVB를 처리한 세포에 제가 처리하는 추출물 A를 처리했을 때"라고 나와있습니다만..

>잘못 기입했습니다. 죄송합니다.

HaCaT 세포에 Sample을 처리하고 한시간 뒤 UVB를 조사하였습니다.

- 그리고 cell은 seed culture 후에 안정화 시간을 충분히 준후에 물질 처리를 했나요?

네 세포는 충분히 안정화 시켰습니다! 

- sampling은 몇시간째 했나요?

Cell Lysate Sampling은

AP-1은 UVB 처리 후 6 H에 Prep MMP-1은 UVB 처리 후 12 H에 Prep 했습니다.

시간별 Induce 조건을 확립한 후 실험을 진행했습니다!

 

같이 디스커션해주셔서 감사드립니다.

MMP-1은 감소하는데, 왜 AP-1은 증가했는지 계속 공부해보고 있습니다..

세포도 다시풀어서 진행해보려고 안정화중입니다.

대왕개구리SPEED  |  2022.11.26   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
sampling point를 여러 point로 하고, p-form과 MMP-1을 동일시간을 포함해서 확인해 보세요.

cell에서 signal이 6h 정도 delay되지 않습니다.
올챙이꿈많은청년  |  2022.11.26   

감사합니다 Speed 선생님!

여러 포인트로 Sampling 시간을 조정해보겠습니다.

 

결과를 확보하면 꼭 공유드리겠습니다.

좋은 주말 되십시오 :)

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