비슷한 경험을 한적이 있습니다.

 

10% APS 냉동해서 사용하고 있나요 냉장해서 사용하고 있나요?

제작 후 보관기간은요?

 

10%가 안정성이 떨어져서 갑자기 망가지는 경우가 있습니다.

10% APS 다시 제작해서 분주하여 냉동보관 해놓고 사용해 보세요

10% APS 5ml를 젤 8~10개 만들 분량 정도로 소분하여 -80도에서 냉동하여 사용하고 있습니다.

한번 제작하면 3달 정도 사용하는 것 같은데 APS 새로 만들어서 사용해보겠습니다. 감사합니다

혹시 upper buffer를 충분히 넣었는지 확인해 보세요.

- APS가 문제가 있으면 gel이 안만들어지기 때문에 이유가 아닙니다.

 

- 전기영동 조건이 어떻게 되나요?

-강시님

upper buffer 웰 덮도록 충분히 넣었고, 가끔씩 전기영동 중 버퍼가 새길래 탱크에도 버퍼를 많이 부어 셀 자체가 웰 위쪽으로 잠기게 했습니다. (셀은 잠기고 두 전극은 안 잠기는 선에서)

 

-SPEED님

155V, 75분 러닝합니다. 

버퍼는 Tris-glycine 에요

- upper buffer가 모자라면 연속적으로 휘어지지 않고 불규칙 적으로 wave가 생기기 때문에 buffer  문제도 아닐겁니다.

 

- sample과 gel문제 중의 하나로 보이기 때문에 우선 sample 문제를 확인해 보는 것이 빠를것 같습니다.

 

- 1) 동일한 gel에서 1, 3, 6, 9, 12, 15lane에 BAS가 있으면 1ug/5ul로

loading해 보세요.

 

- 잘 내려가면 gel문제입니다.

 

- 2) BSA로 해서도 동일하게 곡선으로 내려가면 100V로 내려 보세요.

 

- 잘 내려가면 100V 이하로 실험해야 합니다.

 

- 3) 100V 이하로 해서도 곡선으로 내려가면 전기영동 upper tank의 백금선 문제입니다.

1, 젤 제대로 안들어짐.

2. 런닝버퍼 충분하지 않아서 그럼. 이럴때는 끝까지 채우세요.

gel이 electrode assembly에 잘 조립되지 않아 안에
있는 버퍼가 샜을 수 있습니다 그러면 전압이 제대로 안 걸려 lane 마다 내려가는 속도가 달라 휘기도 합니다
assembly 조립 후 안에 부터 buffer를 부어서 안에 끝까지 다 붓고 밖에 마저 채우면 됩니다
혹시나 안에 버퍼가 샌다면 중간중간 전압을 멈추고 밖에서 안으로 버퍼를 보충해주면 됩니다

답변주신분들 감사합니다.

찾는데 오래걸렸지만 원인은 젤도, APS도, 러닝버퍼도, 샘플버퍼도, 전압도 아니였습니다

모든걸 새로 제작하고 전압도 100V 아래로 했지만 그 정도만 덜할 뿐 동일하게 휘길래 뭐가 문제인가 했더니 젤을 끼우는 어셈블리가 문제였네요... 

백금선이 멀쩡해 보이긴 했는데 다른걸로 바꾸고 4번 정도 내려봤는데 4번 다 멀쩡하니 어셈블리 문제가 맞아보입니다