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질문 retinoic acid 응결 현상 해결방법
알청포도맛 망고(대학원생)  | 2022.11.24 12:45

안녕하세요. 지금 retinoic acid를 이용해서 SH-SY5Y 분화 실험 셋업중인 석사 1학기차입니다.

 

지금 5mM retinoic acid stock을 만들어둔 상태이고요. (DMSO에 녹였습니다!)

media(DMEM)에 희석시켜서 최종 10uM 사용하려고 했는데 RA가 잘 안녹고 떠다니더라구요 ㅠㅠ 

그리고 최대한 vortexing하고 처리해봤더니 cell도 다떨어져 죽었습니다..

같은양의 DMSO만 넣었을땐 안죽는걸로 봐서 RA 때문인거같은데..

혹시 SH-SY5Y분화실험을 해보셨거나 RA를 완벽하게 녹이는 법을 알고계신분 있을까요..?

#retinoic acid
 
#SH-SY5Y
 
#differentiation
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앞다리실험은안될때가더많아  |  2022.11.24   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

저는 다른 세포에 100nM의 농도로 사용했기에 경험이 다를 수 있음을 먼저 말씀드립니다.

sigma R2625 All trans RA기준

100mM stock -80도씨에 저장

1/1000 dultion한 중간농도 100uM stock -20도씨 저장

이후 1/1000 treat이었는데

중간중간 덜 녹는 것은 못봤습니다.

다만 100uM짜리 stock을 4도씨에 보관하였을때도 얼어버려서 잘 녹이고 썼어요

 

알청포도맛 망고  |  2022.11.24   

자세한 답변 정말 감사합니다 ㅠㅠ

혹시 dilution 했을 때 모두 DMSO로 녹이셨나요??

앞다리실험은안될때가더많아  |  2022.11.24   
과자  |  2022.11.24    

제가 사용할 때는 -20도 보관하였다가 사용할 때 water bath stonication 10분 정도 해서 처리했습니다

석사졸업  |  2022.11.28    

안녕하세요. 

혹시 지금 현재는 SH-SY5Y 세포의 분화실험이 잘 진행되고 있나요?

저도 같은 세포를 키우고 있고 같은 문제점을 겪는 중인데.. 

RA가 포함된 배지를 처리하였을 경우, 세포의 morphology 변화는 확인이 되지만 질문자님과 똑같이 세포가 뜨는 경우가 많이 발생합니다.. 

그래서 저도 문제점을 찾는 중에 RA의 solubility 때문인지 고민하던 중이었는데.. 해결 방법은 딱히 찾지 못하였습니다.. 

혹시 어떻게 해결하셨나요? ㅠㅠ 

 

혹시 해결하셨다면... 방법 알려주시면 감사하겠습니다 ㅠㅠ 

그리고 혹시 세포 키우실 때, plate에서 진행하시나요? 아니면 flask에서 진행을 하시나요? ㅠ

저는 원래는 flask에 세포를 키우는데 실험용으로 플레이트로 바꾸고 분화를 시켰었습니다. 그랬더니 세포가 분화 배지때문인지,, cofluency가 높아지면서 plate에서 키워서 뜨게 되는건지 좀 궁금하네요... 

알청포도맛 망고  |  2022.12.05   

저도 아직 해결하지 못하고 계속 방법을 찾아가고 있는 중입니다.. ㅠㅠ

35pi dish에 seeding하고 실험을 진행하고 있구요

저는 현미경으로 봤을때 RA가 잘 녹지 않고 응결된 현상을 봐서 RA 때문에 cell이 떼진다고 생각하고 있습니다..

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