실험 Q&A Microbiology > Bacteria
IPTG induction에 문제가 있습니다.
레벨1 SGKIM (대학원생)
안녕하세요.
현재 target enzyme을 발현하여 기능을 보고자 pET28(+)a에 삽입한 insert gene을 E.coli BL21(DE3)에 transformation하여 IPTG 1mM 농도로 induction 후 발현이 되는지를 실험중입니다.
총 3가지의 후보 target gene을 동일한 vector와 strain을 사용하여 induction하였는데 한가지 target gene은 induction도 과량으로 잘 되었고 soluble 하게 잘 발현이 되었는데요
나머지 2개의 target gene은 전혀 induction이 되지 않는것으로 보입니다.
genscript를 이용하여 codon usage bias를 검토 하고자 CAI값을 확인였는데 잘 발현이 된 효소와 잘 되지 않은 효소의 CAI가 모두 0.68 ~ 0.72 수준으로 별 차이가 없었습니다.
앞으로 IPTG농도의 변화, induction 시간 변화, transformation을 다시 하는 방법등을 계획중에 있습니다.
혹시 이러한 방법 말고도 제가 확인해보면 도움이 될 요인들이 있다면 소중한 조언을 구합니다.
감사합니다.
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