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질문 천연 항생제의 디스크 확산법 실험 실패 원인이 뭔지 알고 싶습니다
알콩자반(일반인)  | 11.22 09:26

 

안녕하세요 고등학교에서 과제 연구를 진행하고 있는 고등학생인데.

저희가  쑥 추출물, 항생제를 사용해서 농도별 항생제 감수성 비교 실험을 하였는데 농도별로 큰 차이가 없었습니다. 그 원인을 알고 싶어 질문드립니다.

 

시료의 제조
1. 아세톤 100% 100ml에 쑥 100g, 75g, 50g, 25g 사용하여 상온에 3일(72시간)동안 침지해둔다.
2. 1번에서 제작한 혼합물을 감압여과하여 쑥 추출물을 얻는다.
3. 항생제 20ml와 증류수 200ml를 섞어 10배 희석된 항생제를 만든다.
4. 3번에서 제작한 항생제에서 20ml를 추출하여 증류수 200ml에 희석해 100배 희석된 항생제를 만든다.
5. 4번에서 제작한 항생제에서 20ml를 추출하여 증류수 200ml에 희석해 1000배 희석된 항생제를 만든다.

.

황색포도상구균에 대한 쑥 추출물의 항생제 감수성 측정
1. 페트리 디쉬 9개에 각각 패이퍼디스크를 3개씩 넣는다.
2. 1개의 페트리 디쉬에 페이퍼디스크에 100% 쑥 추출물을 2㎕ 흡수시킨다.
3. 1개의 페트리 디쉬의 페이퍼디스크에 75% 쑥 추출물을 2㎕ 흡수시킨다.
4. 1개의 페트리 디쉬의 페이퍼디스크에 50% 쑥 추출물을 2㎕ 흡수시킨다.
5. 1개의 페트리 디쉬의 페이퍼디스크에 25% 쑥 추출물을 2㎕ 흡수시킨다. 
6. 1개의 페트리 디쉬의 페이퍼디스크에 항생제을 2㎕ 흡수시킨다.
7. 1개의 페트리 디쉬의 페이퍼디스크에 10배 희석된 항생제을 2㎕ 흡수시킨다.
8. 1개의 페트리 디쉬의 페이퍼디스크에 100배 희석된 항생제을 2 흡수시킨다.
9. 1개의 페트리 디쉬의 페이퍼디스크에 1000배 희석된 항생제을 2 흡수시킨다.
10. 1개의 페트리 디쉬의 페이퍼디스크에 증류수를 2㎕ 흡수시킨다.

11. 시료를 흡수 시킨 패이퍼디스크를 20분간 건조시킨다.

12. 9개의 배지를 90도씩 돌려가면서 면봉으로 황색포도상구균을 펴바른다.
13. 농도별 추출물과 항생제, 증류수를 흡수한 페이퍼디스크를 세균을 묻힌 배지 시료별로 올린다.
14.배지 뚜껑을 닫고 상온에서 24시간동안 배양시킨다.
 

 저희는 농도가 낮아 세균 배양이 억제 되지 않거나 배지를 일정한 온도로 유지해주지 못한 걸로 추측하고 있는데 다른 분들의 생각이 궁금합니다.

#천연항생제
 
#페이퍼디스크
 
#세균 감수성
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리강시  |  11.22 14:40  

추출한 항생물질(?)에 항생능력이 있는지 없는지 확인이 안된 상태에서 너무 많이 희석한것이 아닌가 싶네요.

원액을 사용해보시지요.

시료의 제조 3번 단계에서 10배 희석한 것과 희석하지 않은 시료를 사용해 보세요.

라이  |  11.22 15:27   

1. 여과액으로는 정확한 시료의 농도를 알수없습니다.

  일반적으로는 감압농축/동결건조 등을 하여 시료를 분말화 한 뒤에 용매에 일정량 희석하여 정량적으로 사용합니다.

 

 추천드리는 농도는 2%부터 희석하여 0.125%정도까지 5농도를 설정해보시는걸 추천드립니다.

 

2. 시료양이 너무 적은것으로 보여집니다.

 8mm paper disc를 사용하였다면 20 ~ 50ul 정도는 시료를 접종하시는걸 추천합니다.

 

3. 가장 중요한 항목입니다만 아세톤 추출물이기에 paper disc를 건조하고 나면 배지에 접종했을때 물에 대한 용해도가 나오지 않아 배지로 스며들지 못할 가능성이 있습니다. 그렇게되면 시료자체가 기능을 하지 못할 수 있습니다.

 

4. N.C의 경우도 시료와 항생제 동일한 용매를 사용하여 해당 용매로 설정하는 것을 추천드립니다.

뒷다리CBD 김선우  |  11.22 15:39  

농도별로 차이가 없다는 것이 항생제와 쑥 추출물 둘 다 균 성장을 억제하지 못했다는 건가요? 항생제는 억제하는데 쑥 추출물만 억제하지 못했다는건가요? 

알콩자반  |  11.22 16:23  

모두 억제하였지만 크기가 너무 작고 억제된 크기에 차이가 없었습니다.

대왕개구리SPEED  |  11.22 16:43  

- 2ul로는 확산이 어렵기 때문에 조금 더 많이 올리세요.

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