실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Expression/Purification
효소 안정성 테스트 중에 데이터가 튀는 경우 질문드립니다.
레벨1 효소공부하자 (대학원생)
안녕하세요 선배님들
제가 효소 안정성 테스트를 하고 있는데요..
단백질 분리정제 한 시점부터 (NAD, NADH) 속도를 이용한 Kinetics assay로 24시간 마다 활성을 측정하고 있습니다.
단백질 분리정제는 His-tag을 붙여서 Ni-NTA로 분리정제 하고 있고,
buffer change도 하고 난 후 실험 진행하고 있습니다.
그런데 여기서 문제인 점이... 효소 활성이 시간에 따라 떨어지는것이 당연하다고 생각하는데..
효소 활성을 샘플을 찍는 시간마다 NADH의 감소량을 측정하면 점점 떨어지는 것이 아니라 활성이 높아졌다가 낮아졌다가 그럽니다..
(0h)에 찍은 NADH Absorbance 값이 -0.35라면.. 점점 떨어져서 -0.33, -0.30 이런식으로 되어야하는데.. -0.35, -0.33 ,-0.34, -0.32 이런식으로 들쭉날쭉합니다...
잃었던 활성이 돌아오지는 않을 것 같은데,. 뭘 놓치고 있는 걸까요 ㅠㅠㅠ
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