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BioLab 장재봉 교수
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 전체 > Molecular Biology-Protein > etc.
조회 579  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 transcription factor에 대한 IF assay
알mol min(일반인)  | 2022.11.10 20:08
안녕하세요

transcription factor에 대한 IF 수행중입니다.



target protein은 NFATc2(NFAT1)이구요 inactivation 상태에서 cytosol에 존재하고 activation 되면 핵으로 이동하는데

이것을 관찰하고자 IF를 수행 했습니다.

그런데 이상하게 모든 세포에서 핵이 진하게 염색이 되는 문제가 있어서 어떻게 troubleshooting을 해야할 지 몰라 질문 남깁니다.



fixing은 4% paraformaldehide로 10min 하고, PBS wash 후에 0.2% triton X-100 5min간 수행합니다.

그래서 cytosol에만 존재하는 protein으로 동일하게 실험 해봤더니 마찬가지로 모든 세포 핵에서 검출되네요....

답변부탁드립니다ㅜㅜ
#IFA
 
#transcription factor
 
#핵
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
뒷다리에효효  |  2022.11.10   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
어느 브랜드의 안티바디를 사용하신건지 모르겠지만 Santa cruz경우 ice meoh fixation 진행해 관찰한 이미지가 있습니다. 간혹 fixation 방법에 따라 위치가 다른 경우가 있으니 확인해보세요. 아니면 사용하고 계신 cell말고 다른 종류의 cell에서 확인을 해보시길 추천드립니다.
알mol min  |  2022.11.13   

감사합니다. antibody는 cell signaling 제품이고 주신 내용으로 실험 진행 해봐야겠네요!
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