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낮은 농도 plasmid를 qPCR했을때 two peak가 뜹니다... 조언을 구하고싶습니다......
레벨1 백오덩 (대학원생)
안녕하세요
근래에 qPCR을 진행하고 있는 대학원생입니다....
다름아니라 제가 현재 pUC19 plasmid를 사용하여 qPCR을 진행중에 있는데 plasmid를 serial dillution하여 qPCR을 진행하였을 때 자꾸 낮은 농도의 sample에서 원치않는 melt peak를 확인하여 이에 관해 조언을 구하고자 질문드립니다.......
저는 이것이 qPCR로 측정하기에 너무 낮은 농도여서 이렇게 뜬다고 판단을 하고 있습니다... 지식이 풍부하신분들께 조언을 구하고 싶습니다....
pUC19에서 target한 부분은 ampr부분이며
qPCR condition은
pre denaturation 95도 2min
denaturation 95도 30s
annealing 55도 30s
extension 72도 5s
melt curve작성
으로 진행하였습니다....
qPCR 사진을 첨부드립니다.....
cq 값이 높은 것이 높은 농도의 sample(10^11 copy)이며 낮은것이 낮은 농도(10^5 copy)의 sampleㅇ 입니다.
melt curve 시뮬레이션을 통해 약 87도에서 peak가 뜬다는 것을 확인하였고, 높은 농도(10^11 copy)를 돌렸을 때는 peak가 잘 떳다고 판단되었으나
10^5 copy의 낮은 농도 sample에서는 peak가 요상하게..... 나왓습니다.......
추가 실험으로 더 낮은 농도도 돌려봤는데 그것도 요상한 peak가 나타났습니다......
읽어주셔서 정말 감사합니다...
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