[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
커스텀텍
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
BioLab 장재봉 교수
전체보기 안전점검 LABox
 전체 > Cell Biology > etc.
조회 419  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 WST assay 관련
알올리브나무(대학원생)  | 2022.10.18 10:40

얼마전부터 실험실생활 시작한 초보입니다 ㅠ 

G418 selection을 위한 농도를 결정하려고 WST assay를 하고 있는데 

흡광도를 측정했을 때 같은 조건으로 실험한 8well의 결과들에서 꽤 값이 차이가 많이 납니다. 같은 row에서 심하면 ~0.8까지도 차이가 나요 ㅠ

(96wellplate. 1-12 (column) 까지 serial dilution한 G418 분주 & A~H (row, n=8) 는 같은 조건)

아직 피펫 다루는게 익숙치가 않은 상태라 WST가 동량 안들어가서 이렇게 일정하지 않은 결과가 나오는건가요? (전동으로 한 번에 8well 씩 넣긴 했습니다 ㅜㅜ)

아니면 같은 조건이라도 well마다 세포생존율의 차이가 어느정도 나타나는게 정상인가요? 

같은 조건에서  흡광도 오차가 많이 안 나오게 하려면 어떻게 해야 할까요! ㅠㅠ

#WST assay
 
#absorbance
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
glaso  |  2022.10.18    
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

 

정상적이지 않은 결과입니다.

 

*

일반적으로 WST 실험과 같이 장기간 진행하는 실험의 경우에는 96 well 중에서 가장자리에 있는 well은 제외하고 안쪽에 있는 10*6에 해당하는 60well만 사용합니다.

가장자리에 있는 well에서 media가 증발하게 되면 측정하고자 하는  molecule의 농도가 증발한 media로 인해 농축된 값만큼 높게 측정됩니다.

 

**

Cell을 깔아주는 습관이 중요합니다.

96 well에 cell seeding을 진행하는 과정에서 reservoir에 세포가 골고루 잘 퍼질 수 있도록 파이펫팅을 진행하고 가라앉기 전에 빠르게 다 깔아주어야 합니다. 말씀해주신 정도의 차이라면 애초에 well마다 깔린 세포의 수가 다를 가능성이 높고,

세포를 깔아준다음에 잘 퍼뜨려주려는 의도로 톡톡 쳐주게 되면 오히려 세포가 well의 중앙으로 모이며 불균일하게 깔리게 됩니다.

초보자 때에는 그냥 멀티로 세포를 넣어준다음에 안건드리고 그대로 두는게 가장 좋은 방법입니다.

cell seeding을 진행한 후 하루가 지나면 현미경으로 세포가 고루 잘 깔려 있는지 관찰하시면 됩니다.

 

*** 

멀티가 고장나거나 멀티에 꽂아주는 tip을 실수로 헐겁게 꽂아서 WST가 절반만 들어가고 그러지 않는이상은 WST가 들어가는 양 자체의 variation으로 위와 같은 차이가 보이기는 쉽지 않습니다.

루카스  |  2022.10.18    
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

1. tip 한 번 쓰고 버릴것 (재사용 x) --> seeding 후 팁 확인 

2. 초보면 single pipette 으로 세포 깔면 더 잘나올 수 있음.

* 대부분 세포깔 때 뭉치거나 가라앉아서 동일량의 세포를 seeding 못함.

따라서 적당히 파이펫 에이드로 up down mix 하고 resorvoir 에 담아 파이펫팅 하고 넣을 것.

 현미경 확인 필수

3. seeding 막하고 CO2 incubation에 넣을 때 주의 (흔들리면 안됨)

4. plate reader 기기 읽는 순서대로 WST 시약 처리 할 것.

5. plate reader 기기에 들어가기 전 거품 확인 (거품 제거)

* 이렇게해도 문제있으면 pipette 보정 문제나 손 문제

계속하다보면 저절로 잘하게됩니다. 

대왕개구리SPEED  |  2022.10.18   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

- 세포 실험에서 질문과 같은 문제는 실험을 처음 시작하는 연구자에게 항상

발생합니다.

 

- 실험 재료를 균일하게 분주하는 것은 실험의 기초이지만 상당히 중요한

작업이며 용해된 시약보다 불용성의 미생물 균체, 동물세포 용액을 사용하는

것은 더욱 기술이 필요합니다.

 

- 질문의 문제점은 상당히 많은 부분에서 있을 가능성이 있기 때문에

실험자가 앞으로의 실험을 위해서라도 직접 가능성 있는 부분을 해결하는 수

밖에 었습니다.

 

- 여러번 실험해서 숙련도를 올리는 것이 가장 좋을 듯 합니다.

 

답변하기
할인행사/신제품신기술 광고 검색광고
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
효율적인 Genome Editing의 필수조건은?
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN한국공인대리점] TECAN 자동화장비 신년맞이 상담 이벤트 (3.31까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
파격적인가격 Personal Western Blot Imager 장비 Azure chemiSOLO (12.31까지)
코람바이오텍 코람바이오텍
[Cell Signaling Technology] Primary Antibody 전제품 20% 할인 행사 (2.28까지)
모아바이오 모아바이오
[AFG Scientific] *새해맞이* 20% 특가 할인 프로모션! 2만가지이상의 모든 ELISA Kit.. (2.28까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
한국인이 가장 많이 사용하는 Taq DNA Polymerase 파격할인! 1+1 행사! (12.31까지)
최근등록   더보기 >
protein purification 중 binding 문제   02.04
관리된 소 조직 구할 수 있는 방법이 있을까요?   02.04
Immunoprecipitation 후 immunoblot 결과 해석   02.04
western blot band 개선 좀 부탁드립니다 ㅠㅠ   02.04
qPCT Tm값   02.04
Fixed 조직 갈아서 FACS 해보신 분 계신가요?   02.04
실험하다답이안나와요   02.03
푸른곰팡이 배양 및 streaking 질문입니다   02.03
전체(항생제 미사용을 말하는 겁니다) 미생물상 배양법?   02.03
cell doubling time 질문   02.03
최근답변자 우수답변자
대왕개구리SPEED

개구리토라

알롱암몽키

꽃개구리bio

올챙이해조칼슘풍덩

알란울

개구리무광

알karan

꽃개구리Applied_Mi..

꽃개구리bio

꽃개구리개그

개구리secu

개구리별숲

꽃개구리스카이

꽃개구리발그런

개구리겨우살이

실험관련연재
세오 연재중실전 실험 프로토콜 101
세오 (필명) (Cincinnati Children’s Hospital Medical Center)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
박은총 연재마감후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
Mr.S 연재마감의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재마감실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
이제욱 연재마감생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
필코리아테크놀로지 광고