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질문 alkaline phosphatase 조직 염색!?
올챙이12312(대학원생)  | 2022.10.17 21:54
첨부파일 파일첨부: BCIP,NBT datasheet.pdf (132 KB)

hair dermal papilla 부분 stemness 확인 위해 마우스 피부 조직 cryomold sample을 ALP 염색해 볼 예정입니다.

1. EC나 골세포 ICC외에, 조직 염색 방법은 찾아봤을 때 많이 없어서 과정을 여쭙 싶습니다. 밑의 과정이 맞는지 확인해주시면 감사하겠습니다.

PBS wash --> NBT/BCIP sol. add 15min in dark (파랑색 띄면 멈춤) --> PBS wash --> mounting

2. ALP 염색 자체는 조직이 본래 가지고 있는 효소를 염색하는 것이라, 따로 항체(ex)anti-ALP antibody)를 붙여줄 필요 없나요? NBT/BCIP sol.이 발색제 용도인건 알겠으나, 다른 여러 프로토콜들에 only substrate를 첨가한다고 하지 따로 1차 항체를 붙여준 다는 내용이 없어 궁금합니다.

3. SIGMAFAST BCIP®/NBT(B5655)를 사용해 염색해 볼 예정인데 첨부해놓은 데이터시트지에서 보시다시피, 과정 자체가 블롯용이라 IHC에 참고하기는 어려워보이는데 1.기입해놓은 과정으로 진행하면 될까요..

 

도움주시면 정말 감사하겠습니다..!

#ALP
 
#NBT/BCIP
 
#AP staining
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
앞다리CCCV  |  2022.10.27   

endogenous ALP를 검출하는 것이기 때문에 별다른 작업이 필요없습니다.

올려주신 제품도 사용에 적합해보이며 혹시라도 signal이 파란색이 아니라 검게 나온다면 ethanol로 washing 해주시면 파랗게 변합니다.

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