실험 Q&A Cell Biology > etc.
웨스턴 블롯 질문 드릴게요. 고수님들 도와주세요.
레벨2 진vv (대학원생)
웨스턴 질문좀 드리겠습니다.
논문 작성에 앞서서 오래된 안티바디들 잘 작동하는지 확인 작업중에 있어요.
트렌스퍼 후에 폰슈로 단백질이 잘 내려온 것을 확인 했고 워시 30분 이상 한 후에 블락킹 1시간 정도 수행했습니다. 이후 4도씨에서 14시간 오버나잇 하며 1차를 붙였습니다.
다음날인 오늘 워시를 30분 이상 하고 2차를 붙이고 실온에서 2시간 가량 쉐이킹 후 워시를 다시 했습니다. 이후에 디텍팅을 했는데,, 사진처럼 화면이 아주 까맣게 나옵니다. 이경우 안티바디의 문제인건지,, 아니면 제가 1차를 너무 오래 붙여서 멤브레인이 타버린건지요ㅠㅜ,,, 또한 저렇게 말도안되는 점 하나만 찍혀 나온 경우는 1차가 잘 안붙었다는 뜻으로 해석해도 될까요? 아니면 안티바디에 문제가 생긴걸까요?
질문을 정리하자면 다음과 같습니다.
1. 화면이 검게 나온경우 안티바디의 문제이다. 또는 시간이 너무 오래 지체되었다.(참고로 실험에 문제인가 하고 두번이나 실험했는데 똑같은 결과값을 얻었습니다.)
2. 실험실 선배 말로는 하우스 키핑젤 말고는 실온에 2시간 정도 1차를 붙이는건 안된다고 하는데,, 여기 고수님들은 대부분 1차를 실온에서 붙이는 것으로 보이네요. 하우스키핑젤이 아니라도 오버나잇하지않고 실온에서 1차를 붙여도 되는건지요.
3. 점으로 찍힌경우는 안티바디의 문제보단 제 실력의 문제로 1차가 잘 안붙어서 그렇다고 해석해도 될까요?
Bio마켓 프리미엄