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 전체 > Immunology > ELISA
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질문 ELISA
올챙이hj1226(대학원생)  | 2022.10.10 20:32
ELISA 키트를 구매해서 실험을 진행했는데 흡광을 찍으면 거의 대부분의 웰에서 측정범위보다 높게 찍힙니다. 육안으로 봐도 연노란색이 아니고 갈색으로 보입니다.
샘플의 농도문제라고 하기엔 키트에 들어있던 스탠다드도 측정범위를 벗어납니다.
워싱이 제대로 안됐나해서 두번째 실험에서는 워싱도 신경써서 진행했습니다.(30초간 플레이트를 바닥에 대고 흔들며 5회 반복해줬습니다.)

혹시 ELISA하면서 이렇게 나올만한 다른 원인이 있을까요..
#ELISA
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리CD4+T  |  2022.10.11   

스탠다드가 범위를 벗어나게 나온것이라면, 실험이 잘못되었다고 볼 확률이 높습니다. 스탠다는 제작시 킷에 나와있는 방법에 따라서 하셨는지요? 워싱의 문제라기 보단, 희석하는 초기 농도 값이 잘못되었을 확률이 높을 것 같습니다.  그리고 스탠다드 및 샘플 희석에 사용한 버퍼는 무엇인가요? 그 킷에 아마 절대로 사용해야할 버퍼에 대해서 명시되어있을 겁니다. 다시한번 프로토콜을 잘 읽어보시길 바랍니다.

대왕개구리SPEED  |  2022.10.11   

- STD를 어떻게 만들었나요?

올챙이hj1226  |  2022.10.11   

upload_image

프로토콜에는 이렇게 만들라고 나와있고, 그래서 설명대로 0pg/ml 이상의 농도로 표시된 각 바이알에 1ml의 dw를 넣어서 만들었습니다.

동봉된 설명서에 각 standard의 농도가 0~357pg/ml이라 해서 위의 방법으로 만든 std 용액을 충분히 섞어서 웰에 넣었습니다.

참고로 측정 범위는 0.9pg/ml~357pg/ml이라고 합니다.

대왕개구리SPEED  |  2022.10.11   

- 스탠다드도 측정범위를 벗어납니다.

: STD는 측정을 해서 low~high 범위를 정합니다만 측정 범위를 벗어나는 것은

무슨 뜻인가요?

 

- kit 번호가 어떻게 되나요?

 

올챙이hj1226  |  2022.10.11   

upload_image

 

이 부분을 보고 말씀드린건데, std가 357pg/ml까지 들어있습니다.

키트 번호는 60-3900입니다ㅠㅠ

알pplloo  |  2022.10.13   

(흡광을 찍으면 거의 대부분의 웰에서 측정범위보다 높게 찍힙니다)

이 말씀이 O.D. 값이 측정범위을 벗어났다는 것인가요?

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