실험 Q&A Cell Biology > Cell lysis/Apoptosis
DAB TUNEL staining 결과중 blue stain된 곳에 대한 해석이 안됩니다. 도와주세요ㅜㅜ
레벨2 믽 (대학원생)
안녕하세요, apoptosis cell 을 관찰하기 위해, TUNEL 염색을 의뢰했는데요... 원하는 결과대로 brown cell들을 확인할 수 있었지만, blue stain 또한 관찰되었는데, 이게 결합조직에 염색이 된건지... 샘플마다 blue stain된 정도가 달라 실험조건에 의한 영향이 생긴 건가 싶은데요.. 이렇게 해석해도 되는건지 몰라 문의드립니다. 왜 blue stain이 발견된 걸까요? TUNEL assay만 진행했습니다. control 사진과, treatment 사진을 비교해보면... brown stain된 apoptosis cell 주위에 blue stain area가 존재하는 정도가 treatment 사진이 더 큽니다. treatment 실험군에는 생물체에 스트레스를 주는 요인을 처리한 것이구요. 생물은 복족류 (무척추동물)이며, 간췌장 (hepatopancreas) 조직입니다. DAB는 반응 시 갈색으로 된다고 알고 있는데, 파란색으로 염색되는 경우를 찾아봐도 영 시원찮은 정보밖에 나오지 않네요...ㅜㅜ necrosis가 발생했다고 하는 논문들도 일부 찾아봤지만... 제 결과에 완전히 적용된다고는 하지 못할 정도의 정보들이라서요,ㅜㅜ 해석에 애먹고 있습니다.. *** 찾아본 논문들 1. Identifying and Quantifying Apoptosis: Navigating Technical Pitfalls 2. In situ detection of fragmented DNA (TUNEL assay) fails to discriminate among apoptosis, necrosis, and autolytic cell death: a cautionary note. (그나마 제 결과와 비슷하게, apoptosis signal cell 근처에 necrosis 또한 관찰된 case같습니다. FIGURE 사진이 흑백이지만요..) 3. Impaired high-density lipoprotein anti-oxidant capacity in human abdominal aortic aneurysm (DAB staning시 발견된 blue stain area를 necrotic area로 서술한 부분이 있습니다.) 4. Cd-Induced Apoptosis through the Mitochondrial Pathway in the Hepatopancreas of the Freshwater Crab Sinopotamon henanense 5. Vital staining for cell death identifies Atg9a-dependent necrosis in developmental bone formation in mouse 급한 마음에 글을 잘 못 적은 것 같아 알고 싶은 것을 정리해서 말하자면.. 1. 위 논문들 제외하고, 제가 결과 해석에 참고할만한 문헌이 더 있을까요?? 2. DAB TUNEL assay (staining) 수행 시 blue stain area가 나타난 이유가 뭘까요..? 3. blue stain area를 apoptosis가 아닌, necrosis의 증거(necrosis가 발생함)로 서술해도 괜찮을까요? - 이 경우, necrosis를 확인하기 위한 별도의 assay를 추가적으로 수행할 생각입니다.
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