[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
이엔셀
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
BioLab 장재봉 교수
전체보기 안전점검 LABox
 전체 > Molecular Biology-DNA > Gene Cloning
조회 1262  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 restriction enzyme처리 후 DNA 전기영동 관련해서..
알형준팍(대학생)  | 2022.10.08 15:48

안녕하세요 학부생인데 실험하면서 결과 추론이 안되는 부분이 몇 가지 있어서 질문 드립니다.

 

1. 각각 형태가 다른 plasmid DNA를 전기영동하면 supercoiled form > linear form > nick (or circular ) form 순으로 band가 찍히는 걸로 알고 있습니다

만약 plasmid DNA의 크기가 1kbp라고 가정한다면, 전기영동을 하였을 때 linear DNA는 1kbp부근에서 band가 찍히고, nicked DNA는 1kbp보다 좀 더 큰 위치에서 band가 찍히는 것인가요?

 

2. insert DNA를 만드려고 DNA에 restriction enzyme처리 후 prep과정 거치고 전기영동을 해봤는데요 이상하게 몇몇 밴드는 다른 밴드보다 두껍게 나오네요 

nanodrop 측정했을 때는 농도도 거의 비슷하고 모두 같은 양을 loading하였는데 무슨 문제일까요??..

전기영동 전에 실험하면서 오염된 유기용매에 의해 band 모양이 달라질 수 있나요?

#restriction
 
#전기영동
 
#plasmid DNA
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리안재진  |  2022.10.11   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

수업시간에 교수님 혹은 조교님께 직접 여쭤보는게 더 좋을 것 같네요...

1. DNA 웍을 전문적으로 하는 연구원들에게 안짜른 gel 사진은 DNA의 유무 혹은 농도 정도만 알기 위해서 진행합니다. 즉 안짜른 DNA를 가지고 사이즈를 논하는건 무의미 합니다. 여러 패턴으로 사이즈도 다양하게 나올수 있기 때문이죠.

2. 여러 사람이 loading 했다면 loading의 정확도에 따라서 밴드가 다양하게 나오는게 일반적인 추측이 될것입니다. 혹은 A260에 영향을 줄수 있는 요소들이 흡광도에 간섭을 일으킬수도 있겠네요

대왕개구리SPEED  |  2022.10.11   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

1. 둘다 동일 위치에 나옵니다.

 

2. prep. 수율 문제는 실험자에 따라 항상 발생합니다.

알형준팍  |  2022.10.14   

두 분 답변 감사합니다.

SPEED님 추가적인 질문이 있습니다.

1번에서 둘이 동일한 위치에서 나온다고 하였는데, 둘의 구조가 다른데 동일한 위치에서 나오는 이유가 무엇인가요? 둘의 hydrodynamic size가 비슷해서일까요?

 

대왕개구리SPEED  |  2022.10.15   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

- 질문의 의미에 착오가 있은 것 같습니다.

 

- plasmid 시료의 이동 거리

- linear > nicked

 

- nicked를 자르면 linear와 같은 위치에 나옵니다.

 

- 1kb plasmid의 경우 linear = 1kb, nicked = >1kb

알형준팍  |  2022.10.16   

SPEED님 감사합니다 좋은 하루 되세요!

답변하기
할인행사/신제품신기술 광고 검색광고
코람바이오텍 코람바이오텍
[Cell Signaling Technology] Primary Antibody 전제품 20% 할인 행사 (2.28까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
효율적인 Genome Editing의 필수조건은?
바이오닉스 바이오닉스
[TECAN No.1 한국공식대리점] TECAN NGS 전처리 자동화 System MagicPrep™ 이벤트 (3.4까지)
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN 한국공인대리점] TECAN Microplate reader/ IMPLEN Nanophotomet.. (4.11까지)
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN한국공인대리점] TECAN 자동화장비 신년맞이 상담 이벤트 (3.31까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
무중력으로 스트레스 없이 3D 세포 배양 최적화!
최근등록   더보기 >
protein purification 중 binding 문제   02.04
관리된 소 조직 구할 수 있는 방법이 있을까요?   02.04
Immunoprecipitation 후 immunoblot 결과 해석   02.04
western blot band 개선 좀 부탁드립니다 ㅠㅠ   02.04
qPCT Tm값   02.04
Fixed 조직 갈아서 FACS 해보신 분 계신가요?   02.04
실험하다답이안나와요   02.03
푸른곰팡이 배양 및 streaking 질문입니다   02.03
전체(항생제 미사용을 말하는 겁니다) 미생물상 배양법?   02.03
cell doubling time 질문   02.03
최근답변자 우수답변자
대왕개구리SPEED

개구리토라

알롱암몽키

꽃개구리bio

올챙이해조칼슘풍덩

알란울

개구리무광

알karan

대왕개구리엘피스

꽃개구리Applied_Mi..

꽃개구리juno

꽃개구리발그런

개구리미맹

개구리얕은지식

꽃개구리visavis

꽃개구리Jake

실험관련연재
세오 연재중실전 실험 프로토콜 101
세오 (필명) (Cincinnati Children’s Hospital Medical Center)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
박은총 연재마감후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
Mr.S 연재마감의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재마감실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
이제욱 연재마감생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
머크 광고