실험 Q&A Mol. Biol.-RNA > Purification/Isolation
RNA extraction buffer 제조 문의
레벨1 김무오 (대학원생)
안녕하세요
현재 과실에서 RNA 추출을 하는데 buffer를 제조할 때마다 바닥에 겔층이 계속 생겨 질문드립니다. ㅠㅠ
RNA extraction buffer (200ml 기준) 조성은 아래와 같습니다.
2% CTAP
2% PVP(K-30)
100mM Tris-HCl (pH 8.0)
25mM EDTA (pH 8.0)
2M NaCl
0.5g/L Spermidine
----------------------여기까지 첨가하고 196ml로 3차 증류수로 정용한 후 멸균한 뒤에 beta-mercaptoethanol 4ml(2%)를 첨가합니다.
pH와 가루시약은 소수점 .000 까지 정확하게 맞추고 있으며 시약을 교반시킬 때는 핫플레이트에서 높은 열을 가해서 녹이고 있구요 ㅠㅠ
시약을 완전히 녹이고 멸균을 해도 buffer 밑바닥에 1cm 정도의 겔이 굳어있는 현상이 발생합니다..
여러번 제조했었는데 딱 한번 겔 층이 생기지 않았었습니다. 이때를 제외하고는 동일하게 제조하고 있지만 게속 겔 층이 생기고 있구요..
혹시 비슷한 경험이 있으시거나 해결책을 아시는 분이 계실까요?
답변 부탁드립니다. ㅠㅠ
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