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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
조회 1082  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 western 시 sample cooking
앞다리새슬(과기인)  | 10.06 12:42

western blot 시 sampling 하고 -20oC에 보관해 놓았다가

running 할 때 다시 끓여서 사용하고 있는데,

단백질이 할 때마다 조금씩 달라집니다.

혹시 쓸때마다 cooking 하는 것이 원인이 될 수 있을까요?

#western
 
#sample
 
#cooking
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  10.06 13:27  

- 당연히 달라집니다.

 

- 소분해서 -80도 보관하든지, 정량 -> heating해서 보관하는 것이 좋습니다. 

앞다리새슬  |  10.06 14:49  

아니요 제 말 뜻은 

단백질 정량해서 sample buffer 넣어서 한 번 끓여 놓은 sample을

-20oC에 보관하다가 running 할 때마다

다시 끓여서 쓴다는 말씀입니다.

그러니까 running을 세번째 하게 되면 total 5분씩 3번을 끓이는 셈이죠

결과를 보면 어떤 단백질은 괜찮은데

또 어떤 단백질은 달라지는 것 같아 문의 드린 것입니다.

대왕개구리SPEED  |  10.06 15:25  

- western blot 시 sampling 하고 -20oC에 보관해 놓았다가

: 이 단계가 heating했다는 뜻인가요?

 

- SDS-PAGE sample의 heating은 1회를 기준으로 실험합니다.

 

- 여러번 heating하는 것은 protein stability에 좋지 않을 뿐더러 1회이상의

heating은 불필요한 heating입니다.

 

- 1회 heating으로 SDS, 환원제 반응은 모두 끝납니다.

앞다리새슬  |  10.06 16:08  

- western blot 시 sampling 하고 -20oC에 보관해 놓았다가

: 이 단계가 heating했다는 뜻인가요?

--> 네 맞습니다.

 

불필요한 것이랑 안되는 것은 다른 것 같아서요

혹시 이런 단계를 반복하면 단백질에 변성이 올 수도 있을까요?

개구리차몬드  |  10.06 22:13  
이미 한 번의 heating으로 필요한 변성은 끝났는데 굳이 변성을 한 번 더 하는 이유가 있나요?
앞다리새슬  |  10.10 13:04  

얼렷다 녹이면 homogeneous하지 않을 것 같아서 

다시 cooking하고 있습니다

저희 랩에서는

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