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질문 cell lysate에서 DNA만 깨는 방법
앞다리새슬(과기인)  | 10.04 15:51

cancer cell lysate vaccine 연구를 하는 중인데

동물 실험의 결과가 잘 나와서 

임상연구를 진행하고자 합니다.

그런데 저희 방법 상 

저희의 cell lysate 안에는 DNA가 포함이 되어 있어서

다른 단백질들에는 영향을 주지 않고

DNA만 깨는 방법을 고민중에 있습니다.

현재는 sonicator or DNAse 등을 고려중인데

sonicator는 저희가 원하는 condition을잡아야한다는 난제가 있고

DNAse 처리는 DNA 처리 후에 DNAse를 inactivation 시키는 과정에서 다른 단백질들도 영향을 받을 것이 염려되고 있습니다.

저희의목적에 맞는 좋은 방법 있으면 공유 부탁드립니다.

 

감사합니다.

 

#cell lysate vaccine
 
#DNA degradation
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
dlvlfwns83117@hanmail.net  |  10.04 16:51   

단백질만 침전시켜서 샘플을 만들면 될듯. 

--  |  10.05 01:07   
앞다리새슬  |  10.05 15:58  

freeze thaw 반복하면 DNA도 깨지나요?

저희 cell lysate그렇게 해서 만드는데,,,

그럼 cell lysate 안에 DNA가 남아 있을 가능성에 대한 염려는 사라지는 것 같은데...

대왕개구리SPEED  |  10.05 16:29  
깨져도 size가 random하기 때문에 제거된것이 아니며 임상시료 규격설정이 힘듭니다.
앞다리새슬  |  10.05 18:36  

예전에 주신 comment 데로 sonicator로 제거해보려고 했는데,

본사에 문의를 해봐도 guide line이 전혀 없어서 

어떻게 해야할 지 막막해서 다시 글을 올려보았습니다.

colum으로도 내려봤는데, 

lysate가 거의 걸려서 

centricon 가장 작은 size로 내려볼까요?

와레버  |  10.07 15:20   

DNA만 깬다라는것이 말그대로 DNA를 조각 조각 낸다는 것인지, 아니면 DNA를 제거한다는 것 인지 명확하지 않습니다.

 

또한 동물실험에서 효능을 보고 임상을 진행하려고 하신다는 것 같은데, 추후 동일한 물질임을 증명하지 못하면 임상 진입이 어려울 것 같습니다.

 

가장 좋은것은 똑같지는 않더라도 비슷한 컨셉의 임상을 수행하고 있는 기록을 찾아서 물질을 어떻게 정제하여 GMP 임상시료를 준비하였는지 알아보는 것일 것 같습니다.

앞다리새슬  |  10.10 13:03  

DNA만 깬다라는것이 말그대로 DNA를 조각 조각 낸다는 것인지, 아니면 DNA를 제거한다는 것 인지 명확하지 않습니다.

--> DNA를 제거한다는 뜻입니다.

안타깝게도 아직 임상을 하고 있는 곳이 많이 않아서...

정보를 얻기가 쉽지 않을 것 같아... 고민입니다.

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