안녕하세요. 대학원 입학 준비중인 인턴연구원 입니다. 현재 SLIC cloning을 위한 insert와 vactor를 준비중에 실험 진행이 되지 않아 질문 남깁니다..

1. vactor로 사용되는 plasmid의 경우 약 16kb정도 되는 크기이며, slf1, blp1 두개의 cut enzyme으로 cut하려 합니다. 초반에는 되는것으로 확인되어 문제가 없었는데, 어느순간부터 cut이 되지 않아 다음 스텝으로 진행하지 못하고 있습니다.

2. prep의 경우 30ul정도 elute할때 700ng/ul정도 준수하게 나오고 있어 문제가 없는것으로 생각하고 있습니다. 

3. enzyme의 경우 b사의 blp1, srf1을 사용하고 buffer는 cutsmart(10x) 사용하고있습니다. 

문제를 바로잡기 위해 고려해야 할 부분이 무엇이 있을까요?