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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 western blot band shape에 대해서 여쭤볼게 있습니다
알뚜리(대학원생)  | 09.24 04:08

안녕하세요 

western blot을 진행했는데 detect 후에 band를 보니 band가 가운데가 비어 두겹처럼 나와있더라구요 ㅜㅠㅜㅠ 

 loading할때 intensity가 너무 높아서 빨리내리다보니 band 가운데가 비어있게 된걸까요 ? protei은 30ug, gel은 fastcast kit 사용했습니다 

 

western 초보라 아직 data 해석에 미숙해서요 ㅠㅜ 아시는분 답변 부탁드립니다 ... 

 

band 라인은 하나입니다 ,..!! 

upload_image

 

+)다른 gel의 band는 휘어지게 나왔는데 이 이유도 아실까요 ?? 

같은 gel이여도 휘어진 band랑 안휘어진 band랑 공존합니다 ㅜㅜ

upload_image

 

 

>위에 첨부한 두 사진들의 결과는 모든과정을 동일하게 동시에 진행했으며, Ab만 다른아이들입니다 ㅜㅜ

 

#western blot
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
뒷다리암린이  |  09.24 16:05  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

안녕하세요!

1. 사용하신 antibody가 무엇일까요?

band가 하나가 나와야하는 antibody면 다른 protein이 같이 detection 된 걸수도 있습니다

 

2. 내린 protein에 oil이 끼어있다면 끌려내려오면서 휘어진 것 같은데

사용하신 조직이나 cell이 뭔지 알려주시겠어요??

알뚜리  |  09.25 02:07  

사용한  안티바디는 acc 입니다 다른 gel이나 다른 밴드는 괜찮고, 이전 선배들이 한 실험에서도 이런적은 없어서 다른 protein이 detect된건 아닌것같습니다ㅜㅠ 물론 제ㅔ생각이지만 ...! 

실험에 사용된 tissue 는 liver입니당 

뒷다리암린이  |  09.30 21:29  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

protase inhibitor를 첨가하셨나요?

단백질이 degradation 되었을수도 있다고 생각되네요 ㅠ

만약 membrane을 잘라서 확인하신거라면 blocking이 잘 되지 않아 non-specific binding이 일어난 것일수도 있을것 같습니다

 

만일 nash를 유발시킨 간이라면 지방층이 많이 끼어있어 아래와 같은 밴드 양상이 나올 수 있습니다

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