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 전체 > Cell Biology > Cell Culture
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질문 C2C12 cell culture 분화 유도 확인 (사진)
알mintim99(대학원생)  | 09.23 12:28
첨부파일 파일첨부: 화면 캡처 2022-09-23 122735.png (957 KB)
이미지 첨부파일

c2c12 cell 양만 불리면서 유지하려고 키우는 중인데, high density로 키운 것 같아서 분화가 유도 된 건지 확인해봐야 할 것 같은데, 눈으로는 크게 잘 모르겠습니다..

아래 사진 첨부하겠습니다

density (confluence) 별로 다양하게 찍어봤습니다

#C2C12
 
#c2c12 cell
 
#cell culture differentiation
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  09.23 13:26  

- 어떤 배지에서 배양했나요?

 

- 분화 안된것으로 보입니다.

 

- anti-MHC로 확인해 보면 정확히 알수 있습니다.

알mintim99  |  09.23 16:10  

SPEED님 감사합니다!

culture media는 high glucose DMEM (+10% FBS + 1% p/s)를 쓰고 있습니다.

C2C12 cell 특징이 세포들끼리 contact 되면 분화 미디어 없이도 분화가 유도된다고 들어서 아직은 세포를 분화 없이 키우는 목적이라 혹시 상태가 괜찮은지 알아보고 싶었습니다.

anti-MHC는 western blot 실험을 진행해야 확인 가능한건가요? 이 부분은 잘 몰라서요..ㅠ

대왕개구리SPEED  |  09.23 17:03  

- 아래처럼 myoblast -> 분화가 되면 IHC로 확인 가능합니다.

[출처: January 2007 Journal of Cell Science 119(Pt 24):5106-13}

 

upload_image

알mintim99  |  09.23 18:40  

네, 저도 myoblast에서 myotube로 분화되는 morphology는 찾아봐서 알긴 알지만, 저는 현재 분화를 시작한 것이 아니라서 단지 high density 때문에 분화 유도가 됐는지만 알고 싶었습니다..ㅠㅠㅠㅠ

대왕개구리SPEED  |  09.23 18:55  
육안으로는 정확히 알수없고 형태를 봐서 분화 전으로 보입니다.
알뚜리  |  09.24 04:27  

cell passage가 높으면 분화가 잘 이루어지지 않는다고 알고있습니다

확인해보세여 

개구리안녕난세포야  |  09.26 20:04  

C2C12는 계대 넘기기 전에 confluency가 50-60%정도 유지하면서 셀끼리 뭉치지 않도록 하는 것이 매우매우 중요합니다. 

어느정도 뭉쳤다고 하더라도 트립신 처리 후 충분히 incubation하여서 cell끼리 떨어지도록 해야하고 디쉬나 플레이트를 탁탁쳐서 떨어트리는 등의 방법은 비추드립니다.

그리고 myh 확인해보실 필요없이 저정도로 꽉차면 못쓴다고 보시면 됩니다.

특히 이 cell line은 6-7계대로 사용하시고 그 이상은 불리는건 비추합니다. 

그리고 10% FBS 에서는 튜브가 보일정도로 fusion단계가 잘 일어나진 않습니다. TGFbeta 수준이 높아서 근육분화나 fusion을 억제하기때문입니다.

그래서 보통 proliferaion은 10% FBS조성 메디아를 사용하고 differentiation할때는 FBS가 제외된 2% normal horse serum을 사용하여 분화를 유도합니다.

본내용 ATCC사 메뉴얼에도 있는데 실제로도 실험해보면 꼭 필요한 숙지사항들입니다.

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