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질문 iPSC 배양용 Essential 8 배지 써보신분
뒷다리him(과기인)  | 09.22 16:56

fibroblast로 episomal reporgramming 해서 ips를 만드려고 하는 중인데요.

 

episomal reprogramming kit를 이용하는데 여기 protocol에

essential 8 media를 쓸때는 37도에서 데우지 말고

상온에 둬서 찬기가 없어질때까지 두라는데 이렇게 사용하는게 맞는건가요?

 

"Before use, warm complete medium required for that day at room temperature until it is no longer cool to the touch. Do not warm the medium at 37°C."

 

주말에도 나와서 배지교환해줘야 하는데 37도에서 데우기 없이 상온에서 두려면 시간이 꽤 걸릴것 같아서요ㅜㅜ

 

essential 8 배지 사용해보신분 계시면 이렇게 사용하셨는지

37도에서 데워도 상관없는지 궁금합니다.

#E8 배지
 
#ips
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리clickclick  |  09.23 13:41  

배지에서 37도로 하지 말라고 명시하고 있으면 그 온도로 데우면 안되요. 

보통 이런 배지들은 냉동 유지하고, 냉장 유지해도 1~2주 이내로 써라 이렇게 적혀 있을 거예요. 

섞어서 쓰는 거라면 냉동 제품을 하루 전에 냉장으로 해동하고, 

배지를 만든 다음에 적당량씩 conical tube에 분주해서 냉동 보관하시고, 

필요한 만큼만 쓸 만큼만 냉장 보존해서 쓰면 되요. (반복해서 녹이면 안좋으니깐) 

 

대략 10 mL 나뒀다면, 냉장에 보관되어 있다가 상온에 10분 정도면 

상온이 되던데, 참고하세요. 

 

알GATA3  |  09.24 01:47  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

supplement에 cytokine이 들어있어서 그래요. 애초에 그것만 따로 냉동으로 오는 것도 stability 때문에. 다른 cell line과 달리 PSC 배지를 매일 갈아주는 것도 cytokine이매일 매일 fresh하게 공급되어야 stemness를 유지하기 때문입니다. supplement 만든 배지가 오래되거나,  37도에 둬서 cytokine 활성 떨어지면 막 저절로 분화시작되는 참사가 벌어집니다.

 

whole bottle을 사용하지 마시고, supplement를 final 50ml 분량에 맞춰 aliquot을 만들어 얼려놓고, 필요할 때마다 4도에서 overnight으로 녹여 basal media에 섞어 쓰는 방식으로 하면 되는데, 50 ml tube면 보통 상온에 30분 정도 두면 됩니다. 

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