실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
PCR melting curve peak 관련 질문 드립니다.
레벨1 anfakfen (대학생)
안녕하세요.
PCR 진행 중 primer peak 관련해서 질문 드립니다.
현재 저희가 선배 실험을 그대로 재현하는 중이어서 예전에 사용했던 primer와 같은 sequence로 제작하여 사용 중입니다.
근데 타겟군에서는 melting curve peak가 1개로 일정하게 나오는데 nc군에서는 melting curve peak가 일정하지 않고 다른 쪽에서 1 peak를 찍거나 2 peak를 찍는 경우가 있습니다.
전에 실험했던 선배는 primer 문제는 없다고 했습니다.
PCR cycle은 95도 10분 preheat 후 95도 15초 -> 60도 15초 -> 72도 30초로 40 cycle 진행하였습니다.
primer의 TM값은 58도입니다.
NC 군의 melting curve이고
타겟군의 melting curve 입니다.
PCR을 여러번 진행했는데 매번 같은 결과가 나왔습니다.
재현 실험이라 primer 교체는 최후로 생각하고 있습니다.
답변 주시면 감사하겠습니다.
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