[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
일루미나
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
『2022 하반기 연재 지정·자유 공모』 22개 주제에 대한 연재자 모집
전체보기 안전점검 LABox
 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
조회 413  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 PCR premix 만들었는데 반응이 안됩니다.
알조조조(과기인)  | 09.21 08:27

안녕하세요!

이번에 PCR을 좀 더 쉽게 돌릴 방법을 찾는다고 premix를 만들어서 사용하려고 여러 시도 중에 있습니다.

 

dye까지 들어간 프리믹스를 만들고 싶어서 일반적으로 전기영동을 내릴 때 쓰는 6X loading buffer를 첨가하여 premix를 만들어 PCR을 돌려보았는데요

결과적으로 증폭이 확인되지 않았습니다ㅠㅠ

6X loading buffer 말고 그냥 dye만 넣어서 만들었어야하는 걸까요?

새롭게 만든거랑 시제품이랑 섞어서 돌리면 또 잘 나오거든요... 대체 문제가 무엇일까요ㅠㅠ 혹시 dye 넣고 프리믹스 만들어보신 분 계시다면 조언 부탁드립니다!

#PCR
 
#premix
 
#mastermix
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  09.21 09:44  

- premix를 만들어 사용했다는 것이 어떤 뜻인가요?

 

- 여러개 tube를 반응 할 경우 1개 tube에 PCR mixture를 모두 혼합한 후

여러 tube에 분주 후 사용하지 않나요?

알조조조  |  09.21 10:21  

기존에는 10X rxn buffer, Taq, 10mM dNTP를 섞어 mix를 만들어 사용했었는데요-이 경우 문제 없이 반응이 잘 진행되었습니다,

이번에는 위 mix에서 dye를 추가로 넣어 PCR을 해봤는데 반응이 일어나지 않았다는 말이었습니다!

대왕개구리SPEED  |  09.21 10:37  

- dye 조성이 어떻게 되나요?

알조조조  |  09.21 10:40  

6X DNA Gel Loading Buffer 이고 40% Sucrose, 0.25% Bromophenol Blue 입니다!!

대왕개구리SPEED  |  09.21 10:42  

- EDTA가 안들어 있나요?

 

- 시판 premix dye양이 훨씬 적을 건데 dye양을 1X 이하로 사용해 보세요.

 

 

알조조조  |  09.21 10:54  

전체에서 5:1 정도 비율을 계산해서 넣은 건데도 많이 첨가가 된것일까요?

우선 말씀해주신대로 dye첨가량을 줄여서 실험 돌려보겠습니다!

감사합니다!

대왕개구리SPEED  |  09.21 10:57  
1X는 전기영동 기준이고 반응 기준이 아닙니다.
올챙이암세포  |  09.21 11:02  

일반적으로 loading dye 넣으면 enzyme reaction 중지된다고 알고 있었습니다.

대왕개구리SPEED  |  09.21 11:04  
EDTA가 있는 경우 입니다.
알조조조  |  09.22 08:01  

로딩 다이 양을 줄여 돌리니 증폭 확인 되었습니다!!

PCR 돌리는데 필요없는 성분이 너무 많아서 증폭이 안되었던것 같습니다.

 

오늘도 남겨주신 답변 읽고 많은 공부가 되었습니다.

감사합니다!

대왕개구리SPEED  |  09.22 08:32  

- dye 자체는 반응에 저해를 주지 않기 때문에 농도를 낮춰서 해보는 것이

이런 문제의 해결 방향입니다.

 

- 반응이 잘되었다니 다행입니다. 

답변하기
할인행사/신제품신기술 광고 검색광고
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
재현성 있는 (q)PCR을 위해 필요한 분주 자동화 기기, BMS의 Myra
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
다시 돌아온 패널 프로모션! 모든 고객 패널 2+1 이벤트!! (12.28까지)
사이젠 사이젠
[Cyagen 슈퍼할인] KO마우스 무료 증정/녹아웃 카탈로그 모델 $2950 이상 할인 (12.31까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
코끝이 시린 겨울, 필코리아테크놀로지와 RNA sequencing을 통해 좋은 결과 만나보세요! (12.31까지)
대일랩서비스 대일랩서비스
Thermo Scientific 마지막 겨울 할인 이벤트 최대 25%! (Co2 Incubator, Loca.. (12.31까지)
마크로텍 마크로텍
마크로텍 현미경 보유분 연말 특가판매~!! (12.30까지)
최근등록   더보기 >
fastq 파일 분석 방법   12.01
GPC 이동상 제조법   12.01
blunt end ligation   12.01
살리실산메틸과 염화제이철   12.01
섹션 할 때에 조직 갈라짐   12.01
음식물의 3대 영양소 측정 방법   12.01
나노입자의 in vivo 정맥 투여시, 사용되는 용액에 질문이 있습니다.   12.01
cell이 이상합니다ㅠㅠ( mcf-7)   12.01
ES cell line lentiviral transduction 후 delay된 cell...   12.01
SDA 배지 조성 관련 질문 있습니다   11.30
최근답변자 우수답변자
대왕개구리SPEED

올챙이됴엥

대왕개구리안재진

대왕개구리강시

알Cheddar

알헤우니

올챙이jineee

알ono

개구리빛초롱

개구리Marine

개구리현직백수

개구리얕은지식

꽃개구리발그런

꽃개구리Kozmoj

개구리Daegu*

개구리미맹

실험관련연재
세오 연재중실전 실험 프로토콜 101
세오 (필명) (Cincinnati Children’s Hospital Medical Center)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
박은총 연재마감후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
Mr.S 연재마감의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재마감실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
이제욱 연재마감생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
에펜도르프코리아 광고