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웹진 Vol.24, No.10 (2022년 10월) 발간
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 전체 > Molecular Biology-DNA > Gene Cloning
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질문 개초보대학생이 전기영동 분석에서 질문드립니다...
알아야어여(대학생)  | 09.19 23:35

일단 본격적인 질문에 앞서 본인 개초보 대학생임을 밝힙니다.... 질문 수준이 경악스러워도.....너그러이 양해 부탁...드립니다

Q1. 플라스미드 DNA에 제한효소 2개를 처리했습니다. 그 2개가 인식하는 부위가 각각 하나씩이라면 원형의 플라스미드 DNA가 두 덩어리로 쪼개지는 것이 맞는지...? 그리고 그 두 덩어리가 전기영동을 했을 때 길이가 긴 순서대로 위에서 아래로 band형태로 배치되는 것이 맞는지....?

Q2. 제가 실험을 했을 때 이론상 길이가 짧은 밴드 길이가 원래 28bp가 나와야하는 것 같은데 실제로 실험을 해보니 480bp로 너무 원래 나와야할 것 같은 길이보다 크게 나왔습니다.플라스미드DNA와 제한효소, 완충액 등을 섞는 과정에서 상당히 많이 기포가 생겼었던 거 같은데, 이게 실제로 나와야 하는 band의 길이와 개수에 영향을 줄 수 있는지...? 기포 이외에 이러한 수치에 영향을 줄 수 있는 요인에는 어떤것이 있을지가 궁금합니다....

 

미리 답변 감사합니다...

#전기영동
 
#제한효소
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리아이이이잉  |  09.20 01:35  
Q1. 네. 두개로 나옵니다. 동그라미를 그리고 각기 다른위치에 두개의 표시를 해서 나누어보세요. 동그라미는 두개의 조각이 됩니다.
전기영동의 원리가 무엇인지 생각하면 쉽겠죠. 아가로스갤을 만들면 안에 아가로스가 그물같이 얽혀있고 DNA가 그 그물을 해치면서 내려간다고 보면 됩니다. DNA조각의 크기가 클수록 그물을 해치고 내려가기 어렵기때문에 같은시간동안 작은 조각에 비해 많이 내려가지 못하게 되어 상대적으로 위에 위치하게 됩니다. 참고로 DNA는 말단의 인산기때문에 음전하를 띄므로 -극에서 +극으로 내려가며 따라서 젤의 아랫방향을 +로 둬야합니다.

Q2. 기포는 영향없습니다. 플라스미드 dna를 사용하시면 dna size marker를 1kb단위로 표시되는걸 쓰실텐데 28bp면 dna size marker로도 확인하기 힘들뿐만 아니라 너무 크기가 작아 그냥 젤을 다 통과해버려 밑으로 빠질수도 있습니다. 애초에 DNA 조각 크기가 작아서 signal이 약해 잘 보이지도 않아서 못본걸수도 있습니다.
DNA가 두조각으로 나뉘어야 하는것 같은데 나머지 한조각은 잘보이시는지? 그리고 그 한조각은 제대로된 크기를 가지는지요? 그 한조각의 크기가 예상보다 작으면서 별도의 480bp조각이 보인거면 그거는 plasmid dna상에 같은제한효소로 잘리는 위치가 두 개인데 실험자가 확인을 하지 않은경우로 보입니다. 예를들어 a,b 제한효소중 a 제한효소로 두군데가 잘리니 a와b 제한효소 두개로 잘라도 세조각이 나오게 되는거죠
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