실험 Q&A Microbiology > Bacteria
미생물(유산균) growth curve 그리는 방법
레벨1 니가가라하와이 (대학원생)
미생물의 growth curve를 그릴려고 하는데요,
96 well plate를 이용해서 kinetic mode로 1시간에 한 번씩 측정 전에 shaking 하여 총 24시간 동안 찍으려고 합니다.
여기서 질문은,
1. O.D 600nm에서 흡광도 0.8~1.0 이상이면 값이 정확하지 않아 희석하여 측정해야 한다고 하는데 예비로 실험해봤을 때 stationary phase에서 최고값이 2.5 가까이 나옵니다. 그러면 이럴 때는 중간에 플레이트를 꺼내서 희석하거나 할 수가 없는데 어떤 방법을 사용해야 하나요? 96 well plate를 쓰지 않고 큐벳을 써서 1시간에 한번씩 측정하는 방법 밖엔 없나요??
2. 시간에 따른 흡광도와 log 값의 관계를 보기 위해 0h부터 3시간마다 plating도 동시에 진행할 예정인데, 예전에 0h를 plating 했던 결과를 보면 균 수가 9log 정도가 됐는데 그러면 각 시간별 plating 희석 배수는 어느정도로 하는 것이 적당한가요?
밑에 제가 예비로 실험한 growth curve 그래프를 첨부하겠습니다.
참고로 제가 실험한 방법은
1. glycerol에 1:1로 mix된 균 스탁을 10mL MRS broth에 접종한다.
2. 24h 배양 후 200uL를 따서 새 MRS broth 10mL에 접종한다.
3. 새 MRS broth에 접종하자마자 200uL씩 따서 96well plate에 분주 후 kinetic mode로 24h동안 흡광도를 측정한다.
4. 그동안 새 MRS broth에 접종한 때를 0h로 하여 3시간 마다 plating한다.
(plating 할 때는 접종된 broth에서 100uL를 따서 1X PBS buffer 10mL에 희석한 후 거기서 다시 1mL을 따서 다시 새로운 PBS 9mL에 희석하는 방식으로 serial dilution하여 희석한다.)
답변 기다리겠습니다...
감사합니다..!!
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