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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
조회 629  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 Nested PCR 중 NC, PC 샘플링 문의
알그리심(과기인)  | 2022.09.14 18:04

분자 진단을 이제 배우며 시작하는 단계라 부끄럽지만 문의 드립니다.

Nested PCR 중 negative, positive control 도

시료와 같이 1차 PCR 진행한 것에서 샘플링 해야 되는건지

궁금합니다.

박사님께서 1차 PCR 완료된 것에서 샘플링 하여 진행하는 걸로

알려주셨는데 NC에서도 밴드가 계속 보여서

NC만 1차 PCR 진행하지 않고

2차 PCR 진행하여 확인했는데 밴드가 보이지 않습니다.

정확히 어떻게 해야 하는지 궁금합니다.

그리고 2차 PCR때 primer 농도에 따라 결과 값도 달라지던데

자세한 답변 부탁드립니다. ^^;;

 

 

##Nested PCR
 
##Nested PCR NC, PC
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리CD4+T  |  2022.09.15   

Nested PCR은 input DNA양에 의해서도 결과가 영향을 받습니다. 완전 처음하는 실험이라면 input DNA양을 다르게해서 실험진행도 해보셔서 조건을 잡으셔야 합니다. 

앞다리Anchovy  |  2022.09.16   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

 윗분 말씀대로 1st amplicon의 양에 의해서도 영향을 많이 받습니다. 
저도 단계희석해서 2nd PCR을 진행하는 편입니다. 
 Primer 농도는 그냥 standard 잡아놓은 농도에서 바꾸진 않았어요. 

그리고 2nd PCR할 때도 1st PCR Sample, NC, PC를 template로써 사용합니다. 

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