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 전체 > Buffer/Reagent
조회 672  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 potassium phosphate pH 조절 질문
알dndb1303(대학생)  | 09.07 11:39

안녕하세요. 연구실에서 학부연구생으로 일하고 있는 학생입니다.

transformation을 위해 버퍼를 만들고 있는데요.

논문에 나온 프로토콜대로 만들면 논문에서 제시한 pH가 맞지 않습니다. 

transformation buffer는 다음과 같이 만듭니다.

Transformation buffer (2mM MgCl2, 5mM KH2PO4, 0.5M sucrose, 10% glycerol, pH 7.5) 200ml

  1. MgCl2 (95.211 g/mol) 38mg and KH2PO4 (136.086 g/mol) 136mg (20ml)

    1. dissolved in a small amount of DDW → add DDW to 20ml

    2. Sterilized by 0.45μm sterile filter

  2. Sucrose (342.3 g/mol) 34.23g (100ml)

    1. dissolve it in a small amount of DDW by ultrasonication & agitation
      → add DDW to 100ml

    2. Sterilized by 115℃, 20 min autoclaving → cool to room temperature

  3. Glycerol 20ml (80ml)

    1. dissolved in a small amount of DDW → add DDW to 80ml

    2. Sterilized by 115℃, 20 min autoclaving → cool to room temperature

  • Mix all solutions in a clean bench after they are cooled to room temperature

프로토콜대로 다 만들고나면 보통 pH가 4.5에서 시작하는데요. 처음에는 1N NaOH를 1.8ml 정도 추가해서 pH를 7.5로 맞췄습니다.

그런데 그것 때문인지(는 잘 모르겠지만) transformation이 잘 안 됐습니다. 좀 더 찾아보니까 phostphate potassium buffer 같은 경우는 monobasic, dibasic을 섞어서 만들라고 하는 글을 봐서 계산 사이트에서 200ml(최종 부피) KH2PO4 몰 농도인 5mM을 맞춰놓고 pH 비율을 계산했는데 이렇게 하는 게 맞는 건가요? 논문에서는 KH2PO4 몰농도만 언급해서 K2HPO4를 함께 써도 되는지 모르겠습니다.

https://www.ibric.org/7ad67364-168e-4f16-b36f-f76e14dd4975" width="1031.5" />

#potassium phosphate buffer
 
#pH 조절
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  09.07 12:20  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

- phosphate buffer가 아니라 KH2PO4만 사용한것으로 보입니다만 어떤 TF에

사용하는 용액인가요?

알dndb1303  |  09.08 12:26  

안녕하세요. 그람양성균에 플라스미드를 electroporation하는 실험을 하고 있습니다.

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