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뭔가 다른데 원인이 있지 않나 합니다.
Stock을 제대로 해놓았다면 10년이 지나도 plasmid는 정상적으로 나와야 합니다.
사실 cloning에 관련된 문제는 아주 사소한 일에서 발생을 하지만 그 원인을 찾기가 쉽질 않습니다. 그래서 잘 될때는 아주 잘 되다가도 문제가 발생하면 계속 발행하는 것이 cloning인데 이때는 좀 쉬면서 다른 일을 하던가 아니면 다른 사람의 손을 빌려보는 것도 한 방법일 겁니다.
Loading dye가 없으면 gel loading자체가 어렵습니다. Loading dye라고 해봐야 Tris buffer에 dye와 glycerol (침강제)이 들어 있는 것이 전부입니다. EtBr염색과는 무관한 것이며, 제 생각에는 아마 DNA가 없거나 깨졌기 때문인 것 같습니다.
예전에 미리 뽑아놓았던 DNA를 이용하여 테스트를 해보세요.
-20도에 보관하셨다고 하셨는데, 사용한 Freezer가 일반적으로 가정에서 사용하는 거라면
-20도를 지속적으로 유지되지 않고 소량씩 녹았다 얼렸다를 반복합니다. 안쪽이 얼음이 얼어 붙지 않도록 하기 위해서죠..실험용으로 쓰는 냉동고 (-20)를 보면, 냉동고 안쪽이 얼음으로 가득 얼어 있습니다. 다음번에는 -80도 defreezer에 보관하세요...