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Detergent insoluble fraction의 IP 실험 질문
레벨1 파란돼지 (대학원생)
안녕하세요,
관심있는 단백질의 protein-protein interaction을 확인하고자 immunoprecipitation 실험을 진행중에 있습니다. 확인하려는 단백질이 detergent insoluble fraction으로 aggregation되면서 IP하는데 문제를 겪고 있어 해결 방법이 있을지 질문드리고자 글 작성합니다.
기존에 일반적인 방법으로 soluble fraction IP를 진행할때는 0.5% NP-40 detergent가 포함된 lysis buffer를 사용했습니다. Protein-protein interaction을 깨지 않으면서 Insoluble fraction도 녹여낼수 있고, IP 실험도 진행 가능한 detergent나 buffer 조건이 있을까요?
Reference를 보고 6M urea로 lysis 후 투석하여 기존의 buffer 조건으로 되돌리는 실험을 진행한 경험이 있으나, 투석 시 Urea가 빠지면서 insoluble fraction이 다시 aggregation 되는 것을 확인하였습니다.
관련하여 조언해주시면 감사드리겠습니다.
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