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[우당탕탕 석사 적응기] 석사 1학기 - 새로운 환경, 그리고 후회
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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 Ponceau staining하면 marker만 뜨고 band는 안 나옵니다. 조언 부탁드립니다ㅠㅠ
뒷다리아스널(대학원생)  | 08.18 18:13
첨부파일 파일첨부: Ponceau Solution result.jpg (86 KB)
이미지 첨부파일

transfer 끝나고 nitrocellulose membrance에 Ponceau solution으로 염색하면 marker는 선명하게 나오는데 band는 깨끗하게 안 나옵니다.

 

카세트 삽입할 때 "검은판(음극)-스폰지-3M paper-gel-membrane-3M paper-스폰지-빨간판(양극)" 이렇게 올리고 꾹꾹 누르고 90V, 0.04A, 1 hour transfer 진행하는데요.

 

transfer는 딱 1번 성공했습니다. 

 

transfer가 끝나고 나면, gel에 아무것도 안 남아있어야 하나요?

그리고 gel에 Ponceau 염색해서 단백질이 남아있는지 판별해도 된다는 글도 있던데요. 그렇다면 transfer 끝나고 gel에 Ponceau 염색 후, 단백질이 gel에 있으면 다시 카세트 샌드위치 만들어서 transfer 진행해도 되는 것인가요?

 

웨스턴블롯 초보자는 이렇게 속으로 웁니다ㅠㅠ 

 

#웨스턴블롯
 
#western blot
 
#western blot troubleshooting
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
뒷다리CD4+T  |  08.19 02:09  

가운데 버블이 들어갔다고 보이게는 모든 부분이 하얗네요.

타겟 밴드 사이즈 확인하시고,  트렌스퍼 조건을 조금씩 바꿔보셔야할 것 같습니다.

딱 한번 성공하셨다고 하셨는데 그때도 동일한 조건으로 실험 하신건가요?

-_-  |  08.19 10:14   

트랜스퍼하고 남은 젤을 쿠마시 스테이닝하라는 말 아니었을까요?

멤브레인은 보통 폰슈로 보고요... (말 잘못 써서 수정)

앞다리차몬드  |  08.29 19:14  

일단 ladder만 봐도 기포가 많이 들어가있고 transfer 후 ponceau s로 염색하면 단백질 lane이 쫙 나옵니다

그리고 transfer는 전압보단 전류를 맞춰서 합니다

저는 semi-dry로 하는데 60mA로 1시간 합니다

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