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siRNA로 target gene knockdown이 안되서요.
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레벨1
살려주세요
(대학원생)
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22.08.18 15:08
동일한 조건으로 다른 siRNA를 treat 하면 90-95% knockdown 되는 반면 지금 사용한 siRNA은 3번정도 60% knockdown되고 그외에는 다 증가하는 양상을 보입니다..! 실험과정에 문제가 있을까요? 아니면 siRNA 또는 프라이머에 문제가 있을까요?ㅜ
사용한 세포와 siRNA transfection조건은 모두 동일한 상황에서 'target A' - siRNA에 의해 knockdown이 잘되는데, 'target B' - siRNA에 의해서 knockdown이 잘 안된다는고 하시는데,<br />
그러면 siRNA sequence를 다른걸로 쓰거나 mixed 된걸로 사용해보시고요. 그래도 잘 안되면 Lentivirus - shRNA를 이용해야겠죠.
그리고 targeting하는 mRNA의 coding sequence와 사용한 PCR primer sequence를 확인해서 제대로 된거 사용했는지 확인하거나, 다른 PCR primer를 design해보세요.
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레벨1
살려주세요
(대학원생)
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22.08.24 13:50
감사합니다!