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- kit를 사용하나요?
- assay방법은 어디에서 참고했나요?
- 잘못된 방법입니다.
- assay에서 가장 중요한 것은 STD와 시료 모두 측정 부피가 동일해야 합니다.
- 예를 들어 STD 각 농도 모두 5ul를 측정하면 시료도 5ul 측정해야 합니다.
BSA (ug/ml) |
0 |
2 |
4 |
6 |
8 |
10 |
12 |
14 |
D.W(ul) |
800 |
798 |
796 |
794 |
792 |
790 |
788 |
786 |
Reagent(ul) |
200 |
200 |
200 |
200 |
200 |
200 |
200 |
200 |
Total(mL) |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
1
|
1 |
위의 표에서 BSA 부피가 동일해야 합니다.
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레벨2
하윰
(대학원생)
-
22.08.16 14:13
5ul 이 어디서 나온건가요? 어떻게해서 된다는거죠?
- 5ul는 예를든것이고 STD, sample 모두 동일 부피로 측정하면 됩니다.
-
레벨2
하윰
(대학원생)
-
22.08.17 09:13
그러면 d.w양은 그대로하면될까요? 표에 주신내용으로
- 시료가 동일하게 들어가면 DW도 동일하게 들어갑니다.
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레벨2
하윰
(대학원생)
-
22.08.17 10:47
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BSA Stock soluntion : 1mg/ml |
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BSA(mg/ml) |
0 |
0.3125 |
0.625 |
0.125 |
0.25 |
0.5 |
1 |
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|
BSA(ul) |
5 |
5 |
5 |
5 |
5 |
5 |
5 |
|
sample |
5ul |
D.W(ul) |
795 |
795 |
795 |
795 |
795 |
795 |
795 |
|
D.W(ul) |
795ul |
1x Reagent(ul) |
200 |
200 |
200 |
200 |
200 |
200 |
200 |
|
1x Reagent(ul) |
200ul |
Total(mL) |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
|
Total(mL) |
1 |
이렇게 하면 될까요?
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레벨2
하윰
(대학원생)
-
22.08.17 11:50
정말감사합니다.
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레벨2
하윰
(대학원생)
-
22.08.17 12:10
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BSA(mg/ml) |
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평균 O.D |
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0 |
0.319 |
0.324 |
0.324 |
0.322 |
|
|
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|
0.03125 |
0.322 |
0.325 |
0.323 |
0.323 |
|
|
|
|
0.0625 |
0.327 |
0.33 |
0.33 |
0.329 |
|
|
|
|
0.125 |
0.345 |
0.348 |
0.345 |
0.346 |
|
|
|
|
0.25 |
0.369 |
0.371 |
0.372 |
0.371 |
|
|
|
|
0.5 |
0.429 |
0.424 |
0.424 |
0.426 |
|
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1 |
0.481 |
0.488 |
0.492 |
0.487 |
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brodford assay |
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BSA Stock soluntion : 1mg/ml |
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BSA(mg/ml) |
0 |
0.03125 |
0.0625 |
0.125 |
0.25 |
0.5 |
1 |
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BSA(ul) |
5 |
5 |
5 |
5 |
5 |
5 |
5 |
|
D.W(ul) |
795 |
795 |
795 |
795 |
795 |
795 |
795 |
|
1x Reagent(ul) |
200 |
200 |
200 |
200 |
200 |
200 |
200 |
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Total(mL) |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
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ㄸ또 희석된서 sample 범위에 안나와요
- 시약은 어디서 구매했나요?
- BSA는 어떻게 만들었나요?
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레벨2
하윰
(대학원생)
-
22.08.17 13:19
BSA를 1mg/ml을 20ul 따서
0.5mg/ml는 1mg/ml를 20ul따서 D.W 20ul 녹였어요 . 나머지도 동일하게 했습니다
근데 생각해보니 1mg/ml에서 5ul따서 d.w 795에 녹이고 하면, regard시약 200ul 따면 또 희석이 되는거마죠..?ㅜㅜ
- sample or STD 10ul + 1X 시약 1ml -> mix -> RT 5min -> 측정 해보세요.
-
레벨2
하윰
(대학원생)
-
22.08.17 14:11
D.W없이 Total 1ml 하면 될까요?
[SPEED님께 질문 드립니다!]
SPEED님 감사드려요. 저도 지금까지 잘못된 방법으로 실험하고 있었습니다...
그렇다면 BSA 용액 자체를 DW에 다양한 농도로 dilution 완료한 후에
동일한 volume을 사용해야 한다는 말씀이신 것 맞나요??
정말 감사합니다.
- 그렇다면 BSA 용액 자체를 DW에 다양한 농도로 dilution 완료한 후에
동일한 volume을 사용해야 한다는 말씀이신 것 맞나요??
: 네..
BSA stock에서 농도별로 취해서 assay하는 것이 아니라 stock을 사용해서
농도별로 우선 만든 후 모든 STD point와 sample을 동일 부피로 assay하면
됩니다.