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사이즈가 크다고 4도 O/N으로 transfer 해야 하진 않습니다.
하던대로 하면 되고 transfer 여부는 마커로 확인해서 덜 되었으면 시간을 좀 늘리면 됩니다.
130kDa이면 overnight안해줘도 실온에서 하던 조건대로 100V, 1시간 30분이면 충~~분합니다.
딱히 오버나잇 안 해도 트랜스퍼 잘 되긴 하는데 만약 하신다면
전압을 30볼트 정도로 낮추고 콜드룸이나 냉장고에서 하시면 되고
통 안에 아이스팩은 어느 온도에서 트랜스퍼하든 그냥 넣었습니다.
18-24시간 정도 냅뒀던 거 같네요.
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레벨5
oneday
(대학원생)
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22.08.12 12:59
전압 30V에 전류는 동일하게 0.4A로 16시간 해도되나요?
교수님께서 overnight해야된다고 하셔서 O/N해야하는지 알았습니다.ㅜㅜ
일단은 뭐 교수님이 시키는 대로 해보세요 ㅋㅋ
30V에 100mA~120mA? 정도였던 거 같네요 제 기억엔.
어차피 전원공급장치는 둘 중 하나만 고정해서 진행하니...
16시간이면 전날 17시에 세팅해놓고 퇴근해서 다음날 9시에 체크하시면 될 거에요.
kda가 작으면 필터페이퍼로 오버블롯될 수도 있지만 큰 거는 잘 될 겁니다.
제대로 계산하려면 젤 단위면적 당 전류량(mA / cm2)을 구해서 원하는 프로틴 크기랑
맞춰봐야 하긴 하는데 일단은 저렇게 돌려보셔도 100kda 이상 잡는 건 될 거에요.
연구자들의 아이러니죠
새로운 기술을 연구하지만
정작 새로운 기술에는 보수적인 집단입니다.
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레벨5
oneday
(대학원생)
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22.08.12 15:01
84, 91kDa 프로테인도 O/N 조건으로 트랜스퍼 해도 될까요?
O/N으로 하면 오버블롯되나요?
오버블롯이 걱정되시면 25V에 50~80mA 정도로 더 낮춰서 해보시던가요.
제 기억 상 80-90kda 정도도 30V 정도로 오버나잇 했을 때 오버블롯 심하지 않게
트랜스퍼 잘 됐던 거 같습니다. 연구노트 두고 나와서 좀 찾아봐야겠지만...
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레벨5
oneday
(대학원생)
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22.08.12 16:32
넵 감사합니다!!!!